弯曲菌属与螺杆菌属

一、弯曲菌属

【概述】弯曲菌属(Campylobacter)属于弯曲菌目、弯曲菌科,至少有30个种和亚种。对人致病的有空肠弯曲菌空肠亚种(C jejuni subsp.Jejuni)、空肠弯曲菌多伊尔亚种(C.jejuni subsp doylei)、大肠弯曲菌(C.coli)、胎儿弯曲菌胎儿亚种(C.fetus subsp.fetus)、胎儿弯曲菌性病亚种(C.rectus subsp.venerealis)等,其中空肠和大肠弯曲菌常见,并与人类感染有关。

弯曲呈逗点状、S形或海鸥展翅形的革兰阴性菌,有一个或多个螺旋,(0.2～0.5)μm×(0.5～5)μm。有动力,运动非常活泼。营养要求高,生长较缓慢,常规培养基不能培养,需要微需氧气体环境。

【鉴别要点】

1.标本采集　最常见的标本是粪便(包括肛拭子)和血液,标本采集后应立即送检。弯曲菌抵抗力不强,在室温下可迅速死亡,对热敏感,如预计超过2h不能送检,粪便标本应接种入Cary-Blair运送培养基,置4℃保存,标本在4℃可保存3周。

2.标本直接检查

(1)直接显微镜检查:粪便与肛拭子可直接镜检,查找革兰阴性呈弧形、S形、“海鸥展翅形”或螺旋形的小杆菌;或用暗视野或相差显微镜观察,检查有无“投镖样”或“螺旋样”运动的细菌。

(2)核酸检测:可用PCR方法检测粪便中弯曲菌的核酸。

3.分离培养与鉴定

(1)粪便或肛拭子等标本可直接接种于弯曲菌选择平板,如改良的Skirrow’s培养基、Campy-BAP等,血液应先接种于布氏肉汤,37℃增菌后转种分离培养基。接种后的平板应置微氧环境培养,弯曲菌为微需氧菌,生长时需氧的浓度为5%～10%(V/V),培养的最佳气体环境为含5%O 2、10%CO2及85%N2。空肠和大肠弯曲菌最适生长温度为42℃,一般培养72h后观察菌落:胎儿弯曲菌最适生长温度是37℃,一般培养至少72h到7d后观察菌落;故临床标本需要分别置于37℃和42℃中培养,以免漏检。

弯曲菌有特别的菌落特征,如菌落细小,可表现为粉红、灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样外观,有些菌落沿接种线有拖尾样外观。依据使用的培养基不同,其他类型的菌落也经常可以观察到。

(2)鉴定:弯曲菌属的细菌均不分解糖类,不能在3.5%NaCl条件下生长,不能在空气环境中培养,具体生理生化特征见表1-6-25。

表1-6-25　弯曲菌属主要致病种的生理生化特征

+.大部分菌株阳性;-.大部分菌株阴性;V.不定;S.敏感;R.耐药

4.其他检测方法

(1)免疫学方法:用特异性抗体包被的乳胶颗粒,可用于鉴定空肠和大肠弯曲菌。也可采用酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原进行诊断,血清中抗体测定用于流行病学调查。

(2)DNA探针杂交和PCR扩增:DNA-DNA杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是一种成功的参考方法,PCR扩增技术也正在发展中。

【临床意义】弯曲菌属细菌对人和动物有致病性。在人类和动物的生殖道、肠道、口腔中存在。多引起人类肠道感染,但这种感染通常是自限性的,一般不需进行抗菌药物治疗。也可引起肠道外感染,尤其对于艾滋病和其他免疫缺陷患者。空肠弯曲菌是腹泻最常见的病原菌之一。细菌一般通过污染食物、牛奶和水而经口传播,被感染的人和动物粪便中的活菌可污染环境。

二、螺杆菌属

【概述】螺杆菌属(Helicobacter)属于弯曲菌目的螺杆菌科,本属至少有23种细菌,大部分定居于哺乳动物的胃或肠道,有9个种可从人体分离到,其中能引起人类疾病的主要有3种,即幽门螺杆菌(H.pylori)、菲氏螺杆菌(H.fennelliae)和同性恋螺杆菌(H.cinaedi)。

形态与弯曲菌属类似,是一类弯曲呈逗点状、S形、螺旋形或海鸥展翅形的革兰阴性菌,大小为(0.2～0.5)μm×(0.5～5.0)μm,在陈旧培养物的涂片中有时可呈球杆状。无芽胞,有动力。营养要求高,分离时常规培养基不能培养,生长较缓慢,培养时需要微需氧气体环境,最适生长于37℃,25℃不生长。

【鉴别要点】培养基宜新鲜配制,非选择性培养基可选择巧克力琼脂和含5%羊血的Brucella琼脂,选择性培养基可用Skirrow琼脂和改良的Thayer-Martin琼脂。将研磨均匀的标本用研磨棒蘸取适量匀浆接种,接种后的平板放入35～37℃、微需氧(5%O2、10%CO2、85%N2)、湿润的环境中培养至少72～96h方可见HP菌落生长。菌落较小、圆形半透明。

主要根据生长培养特点、菌落特征、典型的菌体形态和染色性、氧化酶和触酶均阳性、脲酶强阳性、对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感等进行鉴定。HP的主要鉴定特征见表1-6-26。

表1-6-26　幽门螺杆菌的生物学特征

+.阳性结果;-.阴性结果;V.可变的结果

【临床意义】幽门螺杆菌感染了世界范围内一半以上的人口,其发病率的高低与社会经济水平、人口密集程度、公共卫生条件以及水源供应有较密切的关系。我国及大多数发展中国家人群幽门螺杆菌感染因地区有所不同,人群中总感染率高于发达国家。长期应用抗幽门螺杆菌药物治疗,易产生严重的副作用或耐药菌株等问题,目前推荐采用联合用药方法治疗。

(赵建宏　侯天文　张金艳)