【目的】正确掌握白细胞计数的方法。
【方法】显微镜计数法。
【标本类型】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。
【试剂】白细胞稀释液。
【器材】普通光学显微镜、改良牛鲍血细胞计数板、一次性试管、试管架、0.5ml吸管、吸球、微量吸管、乳胶吸头、干脱脂棉、盖玻片、绸布。
【操作步骤】
1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。
2.取一次性试管一支,取0.38ml的白细胞稀释液加于试管底部。
3.充分混匀抗凝全血标本。
4.用微量吸管准确吸取充分混匀的抗凝全血20μl,擦去管尖外部余血,将微量吸管插入含有白细胞稀释液试管的底部,缓慢放出血液,并吸取上清液反复冲洗吸管2～3次,立即混匀。
5.充池:待红细胞完全溶解,使细胞悬液变为棕褐色,再次混匀,用玻璃棒或微量吸管取细胞悬液充入计数池内,静置2～3min,待白细胞下沉。
6.计数:用低倍镜计数四角4个大方格内的白细胞总数。计数压线细胞时,应遵循“数上不数下、数左不数右”的原则。
7.计算:白细胞数/L=N/4×10×20×106=N/20×109。
N表示4个大方格内的白细胞总数;÷4表示每个大方格(即0.1μl)内的白细胞平均数;×10表示将1个大方格容积为0.1μl换算成1.0μl;×20表示血液的稀释倍数;×106将1.0μl换算成1L。
8.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。
【注意事项】
1.所用器材如吸取稀释液用的吸管、微量吸管、改良牛鲍血细胞计数板均应清洁干燥并经过校准,试剂符合要求。
2.规范采集血液标本后立即混匀,不得有凝块或溶血,在2h内检测完毕。
3.加盖玻片方式:WHO推荐采用“推式法”,此法较“盖式法”更能保证充液的高度准确。
4.微量吸管应插入含有白细胞稀释液的试管底部,缓慢放出血液,并吸取上清液反复冲洗吸管2～3次,轻轻混匀。
5.待红细胞完全溶解,使悬液变为清亮的棕褐色,再次混匀,一次性充池成功,避免充液过多、过少或产生气泡。
6.细胞分布。白细胞总数在参考范围内,各计数大方格间的细胞数相差<8个,两次重复计数误差<10%,否则应重新充液计数。
7.白细胞数量过高时,可加大稀释倍数;细胞数量过少,可计数8个大方格的白细胞数或加大取血量。
8.有核红细胞影响。如外周血出现有核红细胞会使白细胞计数结果偏高,必须加以校正。
白细胞校正数/L=100/(100+有核红细胞数)×校正前白细胞总数
【技能要点】
1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。
2.遵循计数原则。
3.校正有核红细胞对白细胞计数的影响。
4.加样准确,细胞分布均匀,各计数大方格间的细胞数相差<8个。
(武湘云 贴彦青)
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