【目的】正确掌握嗜酸性粒细胞计数方法。
【标本】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。
【方法】显微镜计数法。
【试剂】嗜酸性粒细胞稀释液。
【器材】普通光学显微镜、改良牛鲍血细胞计数板、一次性试管、0.5ml吸管、吸球、微量吸管、乳胶吸头、试管架、盖玻片、干脱脂棉、绸布等。
【操作步骤】
1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。
2.取一次性试管一支,加入0.38ml的嗜酸性粒细胞稀释液于试管底部。
3.充分混匀抗凝全血标本。
4.用微量吸管吸取充分混匀的抗凝全血20μl,擦去管尖外部余血,将吸管插入含有嗜酸性粒细胞稀释液试管的底部,缓慢放出血液,并吸取上清液反复冲洗吸管2～3次,混匀。
5.充池:待红细胞完全溶解,再次混匀嗜酸性粒细胞悬液,用玻璃棒或微量吸管取细胞悬液充入计数板两侧的计数池。
6.静置3～5min,用低倍镜,必要时在高倍镜下计数,统计两个计数室中10个大方格内嗜酸性粒细胞总数。
7.计算:嗜酸性粒细胞/L=N×20×106=0.02N×109。
N表示10个大方格内的嗜酸性粒细胞数;×20表示血液的稀释倍数;×106将1.0μl换算成1L。
8.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。
【注意事项】
1.所用器材如吸取稀释液用的吸管、微量吸管、改良牛鲍血细胞计数板均应清洁干燥并经过校准,试剂符合要求。
2.规范采集血液标本后立即混匀,不得有凝块。
3.计数应在1h内完成,时间过久,嗜酸性粒细胞会逐渐溶解破坏,使结果偏低或不易辨认。
4.加盖玻片方式:WHO推荐采用“推式法”,此法较“盖式法”更能保证充液的高度准确。
5.微量吸管应插入含有嗜酸性粒细胞稀释液的试管底部,缓慢放出血液。
6.充池。充池前混匀嗜酸性粒细胞悬液,但不宜用力过猛,一次性充池成功,避免充池过多、过少或产生气泡。
7.应注意与残存的中性粒细胞区别,以免误认,避免造成结果偏高。
8.嗜酸性粒细胞较少时,可增加计数面积。
【技能要点】
1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。
2.遵循计数原则。
3.正确辨认嗜酸性粒细胞,避免与中性粒细胞混淆。
4.在1h内完成,避免嗜酸性粒细胞破坏。
(武湘云 李立新)
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
