【目的】正确掌握血小板计数方法。
【方法】显微镜计数法。
【标本类型】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。
【试剂】10g/L草酸铵稀释液。
【器材】普通光学显微镜、改良牛鲍血细胞计数板、0.5ml吸管、吸球、微量吸管、乳胶吸头、一次性试管、试管架、干脱脂棉、盖玻片、绸布等。
【操作步骤】
1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。
2.取一次性试管一支,取0.38ml的10g/L草酸铵稀释液加于试管底部。
3.充分混匀抗凝全血标本。
4.用微量吸管吸取抗凝全血20μl,擦去管尖外部余血,将吸管插入含有血小板稀释液的试管底部,缓慢放出血液,并吸取上清液反复冲洗吸管2～3次,立即混匀。待完全溶血后再次混匀1min。
5.充池:用玻璃棒或微量吸管取血小板悬液充入计数池内,静置10～15min,待血小板下沉。
6.用高倍镜计数中央大方格内四角和中央共5个中方格内的血小板总数。
7.计算:血小板数/L=5个中方格内的血小板数×109。
8.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。
【注意事项】
1.所用器材如稀释用的吸管、微量吸管、改良牛鲍血细胞计数板均应清洁干燥并经过校准,试剂符合要求。
2.规范采集血液标本后立即混匀,不得有凝块或溶血,操作应迅速,防止血小板聚集。标本采集后,应在1h内计数完毕,以免影响结果。
3.加盖玻片方式:WHO推荐采用“推式法”,此法较“盖式法”更能保证充液的高度准确。
4.微量吸管应插入含有稀释液的试管底部,缓慢放出血液。
5.充池前混匀血小板悬液,一次性充液成功,避免充液过多、过少或产生气泡。充池后静置10～15min,使血小板下沉后再计数。如血小板聚集应重新采血测定。
6.计数时光线要适中,不可太强,注意有折光性的血小板与杂质、尘埃的鉴别。附在血细胞旁边的血小板也要注意,不要漏数。
7.每份标本计数二次,二次重复计数误差<10%,否则应重新充液计数。
【技能要点】
1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。
2.充池后静置时间要在10～15min,使血小板下沉后再计数。
3.正确辨认血小板,注意与杂质、尘埃的鉴别。
(武湘云 贴彦青)
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