【目的】正确掌握红细胞计数方法。
【标本】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。
【方法】显微镜计数法。
【试剂】红细胞稀释液。
【器材】普通光学显微镜、改良牛鲍血细胞计数板、0.5ml吸管、吸球、微量吸管、乳胶吸头、一次性试管、试管架、盖玻片、绸布、干脱脂棉。
【操作步骤】
1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。
2.取一次性试管一支,取2ml的红细胞稀释液加于试管底部。
3.充分混匀新鲜全血标本。
4.用微量吸管吸取混匀的新鲜抗凝全血10μl,擦去管尖外部余血,将吸管插入含有红细胞稀释液的试管底部,缓慢放出血液,并吸取上清液反复冲洗吸管2～3次,立即混匀。
5.用玻璃棒或吸管取细胞悬液充入计数池,静置2～3min,待红细胞下沉后计数。
6.高倍镜下依次计数中央大方格四角和正中共5个中方格内的红细胞。计数压线细胞时,应遵循“数上不数下、数左不数右”的原则。
7.计算:红细胞数/L=N×5×10×201×106=N/100×1012。
N表示5个中方格内的红细胞数;×5表示将5个中方格红细胞数换算成1个大方格红细胞数;×10表示将1个大方格容积为0.1μl换算成1.0μl;×201表示血液的稀释倍数;×106将1μl换算成1L。
8.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。
【注意事项】
1.所用器材如稀释用的吸管、微量吸管、改良牛鲍血细胞计数板均应清洁干燥并校准,试剂符合要求。
2.规范采集血液标本后立即混匀,不得有凝块或溶血,在2h内检测完毕。
3.红细胞稀释液要过滤,应无任何杂质、微粒等,以免杂质、微粒等被误认为红细胞。也可用新鲜生理盐水代替。
4.充池前混匀红细胞悬液,一次性充池成功,避免充液过多、过少或产生气泡。
5.细胞数量明显增加或减少可适当增大或缩小稀释倍数,按实际稀释比例换算。
【技能要点】
1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。
2.遵循红细胞计数原则、结果准确。
(武湘云 冯志山)
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