不规则抗体筛查

【目的】正确掌握不规则抗体筛查方法。

【方法】微柱凝胶法。

【标本】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。

【试剂】广谱微柱凝胶抗球蛋白卡、市售筛检细胞。

【器材】试管、滴管、加样枪、普通离心机、血型血清学专用离心机、37℃水浴箱。

【操作步骤】

1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。

2.受血者新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)3ml在1000g条件下离心5min,离心后血浆无溶血、乳糜,然后分离血浆备用。

3.将筛检细胞配成0.8%～1%红细胞盐水悬液。

4.取广谱抗人球蛋白卡(抗IgG+C3 d)一张,每份待检样本标记3孔,分别标记为“Ⅰ”、“Ⅱ”和“Ⅲ”。

5.每孔按照标记加入相应的0.8%～1%筛检细胞悬液各50μl。

6.向标记的每孔中分别加入受血者血浆25μl。

7.将微柱凝胶卡垂直横向竖立在台面上,轻叩卡的左右边缘混匀加样槽中的血浆与红细胞,混匀后置于37℃水浴箱中孵育15min。

8.取出后置于血型血清学专用离心机离心5min。

9.离心结束后,取出,观察判定结果并记录。

10.判定标准。

(1)阳性结果:红细胞浮在凝胶表面或胶中。

(2)阴性结果:红细胞沉积于微柱凝胶孔的底部。

(3)溶血反应:微柱凝胶管中液体出现清澈透明红色,表示发生溶血(排除机械、人为操作错误等原因),视为阳性结果。

(4)其他:阳性结果需要进一步检测抗体特异性。

11.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。

【注意事项】

1.试验前应将新卡离心,以免微粒内容物交叉污染。

2.若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时,不可使用。

3.撕开凝胶卡封口膜时,动作应轻柔不能用力过猛。

4.红细胞悬液的浓度为0.8%～1%,浓度过高或过低会影响检测结果。

5.血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白,否则会在微柱凝胶卡中阻止红细胞沉淀,呈现假阳性反应。

6.溶血、脂血、细菌污染的标本会影响检测结果。

【技能要点】

1.严格遵守操作规范。

2.结果判读正确。

(邵智利　陈　静)