抗体抗原结合叫什么

一、概 述

甲状腺功能紊乱为目前最常见的内分泌疾病,血浆中99%以上的三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine assay,T 3)和甲状腺素(thyroxine concentration assay,T 4)可与血浆蛋白发生可逆结合,主要与甲状腺素结合球蛋白结合,血浆中仅有0.1%～0.3%的T 3和0.02%～0.05%的T4为游离的,由于游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine assay,FT3)和游离甲状腺素(free thyroxine concentration assay,FT 4)才能进入靶细胞发挥作用,所以FT 3、FT 4的水平更能真实反映甲状腺功能状况因而具有更重要的临床参考价值。

T 4的合成和分泌受下丘脑-腺垂体-甲状腺轴调节。FT 3、FT 4水平的变化,负反馈调节下丘脑促甲状腺激素释放激素(TRH)及垂体促甲状腺激素(Thyroid Stimulating Hormone, TSH)释放,TRH作用为促进腺垂体合成和释放TSH,亦有弱的促垂体合成释放生长激素和催乳素作用。FT 3、FT 4水平对腺垂体合成和释放TSH的负反馈调节最重要。

二、病人准备

1.药物

(1)一般用于治疗动脉硬化、卒中、脂类代谢失常、高血压、冠心病和血液循环障碍性疾病的药品中均含有生物素,由于电化学发光免疫分析法试剂中有生物素化的抗体参与,因此,接受高剂量生物素(>5mg/d)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8h后才能采血。

(2)治疗浓度的乙酰水杨酸和呋塞米可升高FT 3水平,而后者仅可影响FT 4水平。

(3)使用含D-T 4降血脂制剂的病人要测定甲状腺功能,须停药4～6周,等恢复生理状态后再进行FT 4测定。

(4)肝素治疗的患者不宜做甲状腺功能检查,检查结果会人为的升高,肝素使脂蛋白酯酶刺激组织释放脂肪酸,脂肪酸可有效地与甲状腺素竞争清蛋白的结合位点,因此,最后一次用肝素和采血做检测的时间间隔应>1周。

(5)多巴胺、皮质醇可显著减少TSH的释放,在使用这些药物时TSH水平可抑制到甲状腺功能亢进症的水平。

(6)生长抑素和5-羟色胺也可使TSH分泌减少。

2.饮食 除了药物治疗以外,避免食用大量含碘高的食物,如海藻类食品。

3.影响因素

(1)肝病、热量丧失、妊娠后期、糖尿病未控制等情况脂肪酸生理性升高,脂肪酸可有效地与甲状腺素竞争清蛋白的结合位点从而使测定结果产生误差。

(2)肝素使脂蛋白酯酶刺激组织释放脂肪酸,脂肪酸可有效地与甲状腺素竞争清蛋白的结合位点,虽然在体外由于三酰甘油的酶水解作用可以诱发脂肪酸升高,但是脂肪酸对结果的影响是发生在肝素注入和采样的时间间隔中。

(3)由于内源性的T3可干扰FT 3实验,所以对以下疾病应该测抗体滴度,如甲状腺癌,原发性甲状腺肿大和慢性淋巴细胞性(Hashimoto’s)甲状腺炎等。

(4)外周甲状腺激素抗体、异嗜性抗体,特别是人抗鼠抗体和类风湿因子都是甲状腺激素分析中重要的干扰因子。自身抗体会引起分析特异性干扰,类风湿因子和异嗜性抗体可能会引起方法特异性干扰。

(5)在某些非甲状腺疾病和急性精神疾病,TSH水平急剧波动使结果难以分析,应待病情稳定后重新评价或连续观察TSH的动态变化。

(6)孕期FT 4连续下降至5ng/L(6.4pmol/L),可能是因为碘的增加;大约3%孕妇TSH明显降低或无法测到原因可能是由于高hCG浓度所引起的。

三、标本采集

1.采集时间

(1)FT 3,FT4:分泌存在昼夜节律,每日分泌高峰出现在清晨2:00～4:00,低谷则在下午17:00～18:00,一般在清晨起床前采血。

(2)TSH:分泌在全天比较稳定,任何时候抽取都能得到有用的临床资料。采集静脉血于普通试管(或抗凝管)中,4h内送检。

2.标本保存 血清和血浆均可,但都不能用有明显溶血或脂血症的标本。

(1)血清:收集到普通试管中,离心分离血清。

(2)血浆:EDTA-K 3,柠檬酸钠,氟化钠、草酸钾作抗凝剂均可,不应该收集到含有肝素的管中(肝素使脂蛋白酯酶刺激组织释放脂肪酸,脂肪酸可有效地与甲状腺素竞争清蛋白的结合位点导致结果产生偏差)。

离心分离后的血清或血浆2～8℃可稳定7d,-20℃至少可稳定1个月,严禁用叠氮钠防腐。

四、试验方法及正常参考范围

(一)游离三碘甲状腺原氨酸测定

1.放射免疫测定法 采用均相竞争机制原理,标准品或样品中的FT 3和加入的碘标记的抗原共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。当样品中的FT 3浓度较高时,与抗体结合的标记抗原就少,反之亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物,并测定结合物中的放射性。因标记抗原的结合量与样品中FT 3呈一定的函数关系。因此,通过数学处理就能计算出样品中FT3的浓度。

正常参考范围 6.68pmol/L±1.3pmol/L

2.时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fluorescence immunoassay technology,

Tr FIA) 试剂盒采用二抗包被反应孔。加入待测血清、抗FT3单克隆抗体(单抗)温育。抗FT3单抗和包被在微孔板上的二抗结合的同时,检样中的FT 3和抗FT 3单抗结合,形成抗原抗体免疫复合物。温育后洗板,加入铕标记FT3和抗FT3单抗上剩余的位点结合,再经温育后洗板,加入解离增强液将标记在复合物中的铕离子解离。在溶液中,铕离子和增强液中的有关成分形成高荧光强度的微囊螯合物,荧光强度和样品中的FT 3浓度成反比。

正常参考范围 4.7～7.8pmol/L

3.化学发光免疫分析法 即用过量的碱性磷酸酶标记抗原(ALP-FT3)与检样中未标记抗原(FT 3),在反应体系中竞争结合特异性的结合位点。当反应达平衡时,加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,可捕获ALP-FT 3-Ab抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,后者在碱性磷酸酶(ALP)的作用下,迅速发出稳定的光量子。

正常参考范围 3.67～10.43pmol/L

4.电化学发光免疫分析法 待测抗原(FT 3)、生物素化的FT 3竞争性地与钌标记的抗FT 3抗体结合,待测抗原(FT 3)的量与生物素化的FT 3和钌标记的抗FT 3抗体所形成的免疫复合物的量成反比,加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获上述免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的FT 3含量成反比。

正常参考范围 2.8～7.1pmol/L

(二)游离甲状腺素(FT4)测定

1.放射免疫测定法 采用均相竞争机制原理,标准品或样品中的FT4和加入碘标记的抗原共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。当样品中的FT4浓度较高时,与抗体结合的标记抗原就少,反之亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物,并测定结合物中的放射性。因标记抗原的结合量与样品中FT 4呈一定的函数关系。因此,通过数学处理就能计算出样品中FT 4的浓度。

正常参考范围 16.17pmol/L±4.78pmol/L

2.时间分辨荧光免疫分析技术 试剂盒采用二抗包被反应孔。加抗FT 4单克隆抗体(单抗)温育。抗FT 4单抗和包被在微孔板上的二抗结合,温育后洗板,加入待测血清,其中的FT 4和抗FT 4单抗结合形成抗原抗体免疫复合物。温育后洗板,加入铕标记FT 4和抗FT 4单抗上剩余的位点结合,再经温育后洗板,加入解离增强液将标记在复合物中的铕离子解离。在溶液中,铕离子和增强液中的有关成分形成高荧光强度的微囊螯合物,荧光强度和样品中的FT 4浓度成反比。

正常参考范围 8.7～17.3pmo/L

3.化学发光免疫分析法 即用过量的碱性磷酸酶标记抗原(ALP-FT4)与检样中未标记抗原(FT4),在反应体系中竞争结合特异性的结合位点。当反应达平衡时,加入联有羊抗鼠IgG抗体的磁性颗粒,可捕获ALP-FT 4-Ab抗原抗体复合物,在磁场的作用下自行沉淀。经洗涤并吸弃废液后加入发光底物AMPPD,后者在ALP的作用下,迅速发出稳定的光量子。

正常参考范围 11.2～20.1pmol/L

4.电化学发光免疫分析法 待测抗原(FT 4)、生物素化的FT 4竞争性地与钌标记的抗FT 4抗体结合,待测抗原(FT 4)的量与生物素化的FT 4和钌标记的抗FT 4抗体所形成的免疫复合物的量成反比,加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获上述免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的FT 4含量成反比。

正常参考范围 12.0～22.0pmol/L

(三)促甲状腺激素测定

1.放射免疫测定法 采用均相竞争机制原理,标准品或样品中的TSH和加入的碘标记的抗原共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。当样品中的TSH浓度较高时,与抗体结合的标记抗原就少,反之亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物,并测定结合物中的放射性。因标记抗原的结合量与样品中TSH呈一定的函数关系。因此,通过数学处理就能计算出样品中TSH的浓度。

正常参考范围 0.4～4μU/ml

2.时间分辨荧光免疫分析技术 TSH检测为双抗体夹心Tr FIA法。用一株抗h TSH单克隆抗体(单抗)包被反应板。加入待测血清后再加入铕标记的另一株单抗,两种抗体与检样中的h TSH形成免疫复合物。慢速震荡温育60min后洗板,加入解离增强液,将标记在抗体上的铕离子解离到溶液中,与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊,其荧光强度与样品中的TSH浓度成正比。

正常参考范围 0.63～4.19μU/ml

3.化学发光免疫分析法 采用CLIA的夹心法,即用过量标记抗体检测抗原。待测抗原(TSH)与鼠抗人TSH单克隆抗体(m Ab)、碱性磷酸酶标记的羊抗TSH抗体(ALP-g Ab)反应,TSH的量越多,与m Ab和ALP-g Ab的结合量就越多。再经洗涤吸弃废液后加入发光底物AMPPD,后者在ALP的作用下,迅速发出稳定的光量子,光子的量与m Ab-TSH-ALP-g Ab的量(即TSH的量)成正比。

正常参考范围 0.2～7.0m U/L

4.电化学发光免疫分析法 待测标本、生物素化的抗TSH单克隆抗体与钌标记的抗TSH另一位点单克隆抗体在反应体系中混匀,形成双抗体夹心抗原抗体复合物。加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获该免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,无关的各种游离成分被吸弃。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的TSH含量成反比。

正常参考范围 0.27～4.20m U/L

五、临床意义

1.原发性甲状腺功能亢进症。

2.原发性甲状腺功能减退症。

3.垂体TSH瘤、异源性肿瘤(分泌TSH)、甲状腺激素抵抗综合征(全身或垂体性抵抗)及手术后监测。

4.用s TSH监测正在治疗中的甲状腺功能亢进症或甲状腺功能减退症。

5.新生儿出生后前3d,因面对与母体内截然不同的环境,处于高度应激状态,血中TSH水平急剧升高,4～7d后,始趋于一较稳定水平。