弹性纤维是结缔组织纤维的一种,新鲜时呈黄色,直径0.2~1.0μm,具有弹性,常呈卷曲状,分布在有伸展收缩功能需要的组织或器官,如皮肤、动脉、声带、韧带等。
(一)Weigert雷锁辛品红法
1.试剂配制
(1)试剂:碱性品红2g,雷锁辛4g,蒸馏水200ml与30%三氯化铁25ml。
(2)配制方法:取500ml烧瓶加入蒸馏水和雷锁辛,用玻璃棒搅拌均匀,加热至沸腾,持续1~2min,再加入30%三氯化铁水溶液,继续搅拌直至煮沸后2~3min,此时溶液变为紫罗蓝色,冷却后过滤,倒去滤液,将滤纸和沉淀物一起放入烤箱烤干。将滤纸与沉淀物一起放入95%乙醇200ml,加热溶解,取出滤纸,冷却后过滤,用95%乙醇凑足200ml,再加盐酸4ml,即可使用,置于4℃冰箱保存,可长期使用。
2.操作方法
(1)切片脱蜡至水。
(2)用0.5%高锰酸钾水溶液氧化5min。
(3)自来水洗,蒸馏水洗。
(4)用2%草酸漂白1~2min。
(5)自来水洗,蒸馏水洗。
(6)入95%乙醇。
(7)入Wergert雷锁辛品红液,染色1~2h。
(8)用95%乙醇分化至背景清晰。
(9)用Van Giesson液或核固红行对比染色。
(10)脱水,透明,封固。
3.结果 弹性纤维:深蓝或深黑色;其余成分染色视对比染色。
4.注意事项
(1)溶化沉淀物应在水浴中进行,不要直接于明火上加热溶解。
(2)配制后的染液用小磨口瓶装,以防溶液挥发,影响染色效果。
(3)Wergert雷锁辛品红液虽可保存较长时间,但用前现配更好。
(4)有学者提出切片透明不要用苯酚二甲苯。
(二)醛品红法
1.试剂配制
(1)醛品红液:碱性品红1g,70%乙醇98ml,三聚乙醛1ml与浓盐酸1ml。配制方法:将品红溶于乙醇,再加入浓盐酸和三聚乙醛,混合后室温放置2~3d,成熟后(染液由红色变为深紫色)即可使用,置于4℃冰箱保存,使用期为1~2个月。
(2)橙黄G液:橙黄G2g,蒸馏水100ml,磷钨酸5g。配制方法:先用蒸馏水尽量溶解橙黄G,加入磷钨酸,充分混合,放置一夜,室温保存,用时取上清液。
2.操作方法
(1)切片脱蜡至水。
(2)用0.5%高锰酸钾氧化5min。
(3)自来水洗,蒸馏水洗。
(4)用2%草酸漂白1~2min。
(5)自来水洗,蒸馏水洗。
(6)入70%乙醇浸泡1min。
(7)入醛品红染液浸染10~15min。
(8)用70%乙醇分化,至无余色脱下为止。
(9)用橙黄G做对比染色,约1s,稍水洗。
(10)脱水,透明,封固。
3.结果 弹性纤维:深紫色;背景:不同程度黄色。
4.注意事项
(1)醛品红液在成熟之后方可使用,染色最佳时间一般在配制后7~10d,应用染色缸浸染并盖好盖,以避免染液挥发。
(2)分化时应随时观察切片,为防止褪色过度,分化剂可用95%乙醇。
(3)橙黄G液用于复染,染色不宜过深。
(三)地衣红染色法
1.染液配制
(1)试剂:地衣红1g,70%乙醇99ml与浓盐酸1ml。
(2)配制方法:将地衣红溶于乙醇(可用水浴加热助溶解),冷却过滤后加入浓盐酸,室温放置1~2d,4℃保存,备用。
2.操作方法
(1)切片脱蜡至70%乙醇。
(2)入地衣红染液中浸染3h(室温)或1~2h(37℃)。
(3)用70%乙醇分化,完全洗去地衣红液,稍水洗。
(4)用橙黄G对比染色,约1s,稍水洗。
(5)脱水,透明,封固。
3.结果 弹性纤维:棕红色或深棕色。
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