肌组织也称肌纤维,呈长纤维状,主要由肌细胞构成,分为平滑肌、心肌和骨骼肌三种。平滑肌在呼吸道、消化道和血管分布,无横纹。心肌在心壁和近心脏大血管壁分布。骨骼肌在骨骼分布,受躯体神经支配,是随意肌。骨骼肌和心肌都有横纹,均为横纹肌。肌纤维在HE染色中呈红色,用Van Gieson染色法和Masson三色等特殊染色可区分肌纤维和胶原纤维,用磷钨酸苏木素(PTAH)染色法可以显示横纹。这里仅介绍用于横纹肌染色的磷钨酸苏木素(PTAH)染色法。
(一)试剂配制
1.磷钨酸苏木素染液 苏木素0.1g,蒸馏水100ml与磷钨酸2g。
2.配制方法 用蒸馏水分别溶解苏木素与磷钨酸,然后将两种液体充分混合,放置在光亮处1~3个月待熟化后才可使用,装于棕色瓶保存。
(二)操作方法
1.切片脱蜡至水。
2.Zenker液中过夜。
3.自来水洗,蒸馏水洗。
4.用0.5%碘酒处理10min。
5.自来水洗,蒸馏水洗。
6.用5%硫代硫酸钠脱碘5min。
7.自来水洗,蒸馏水洗。
8.高锰酸钾液处理5min。
9.自来水洗,蒸馏水洗。
10.用2%草酸液漂白2min。
11.流水冲洗3min,蒸馏水洗。
12.磷钨酸苏木素液染色24~48h。
13.用95%乙醇快速分化。
14.脱水,透明,封固。
(三)结果
横纹肌纤维、纤维素、细胞核、核仁和神经胶原纤维等:蓝色;胶原纤维、网状纤维、软骨基质:棕红色;弹性纤维:紫色。
(四)注意事项
1.骨骼肌的横纹随染色时间延长而不断加深,应第2天取出切片观察染色效果,决定染色时间,以免过染。
2.水洗或95%以下浓度乙醇长时间洗切片会使着染的横纹褪色,因此磷钨酸苏木素染色后不用水洗,直接用95%乙醇快速洗去染液,即可脱水、透明、封固。
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