体内药物分析方法

体内药物分析采用的分析方法众多，可以分为以下几类:色谱法及其联用技术、免疫法、光谱法、放射性核素标记法和生物学方法等等。各种方法分别具有不同特点，实际应用的时候应根据待测物的性质、浓度范围、预处理方法、实验目的和实验室的条件等情况综合考虑，选择合适的方法进行测定。

1.色谱法及其联用技术

色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效毛细管电泳法(HPCE)和薄层色谱法(TLC)等。其中TLC现在很少用于体内药物分析。色谱联用技术有液相色谱－质谱联用(LC－MS)、气相色谱－质谱联用(GC－MS)、高效毛细管电泳－质谱联用(HPCEMS)、液相色谱－核磁共振联用(LC－NMR)等。色谱法具有分离分析能力，其专属性和灵敏度较高，是体内药物分析中常用的方法。近20年来，随着色谱方法的普及，其在体内药物分析的方法中占据着主导地位。特别是高效液相色谱法(包括超高效液相色谱，UPLC)以及其与质谱联用(LC－MS)是体内药物分析中使用最多的方法。据不完全统计，自1990年以来，在公开发表的相关文献中，高效液相色谱法占体内药物分析方法总数的50%以上。不断开发的各类型液相色谱柱和检测器，使得高效液相色谱技术适合于绝大多数药物的体内分析。特别是液相色谱与质谱、核磁共振联用，不但提高了其分析的灵敏度(将常规HPLC的μg·mL－1级提高到ng·mL－1级)，而且能进行结果确证(与MSn、NMR联用)，这使得LC－MS、LC－NMR在药代动力学研究(特别是代谢研究)方面的应用非常广泛。高效液相色谱及其联用技术目前是体内药物分析的主要分析技术。气相色谱法是最先兴起的具有分离分析功能的一种色谱技术，具有分离效能高、选择性好和灵敏度高的特点。但气相色谱法存在一定的局限性，限制了它的应用。其主要适用于气态、易挥发的成分或者衍生化之后易挥发的成分的测定。GC－MS是色谱联用技术中最早开发的一种联用技术，技术成熟，并建立了大量化合物的谱库，对未知结构的成分分析较为方便。GC和GC－MS由于其局限性，在体内药物分析中主要应用于滥用药物的检测及中药中一些易挥发成分的分析。此外，另外一种色谱技术高效毛细管电泳在体内药物分析中的应用也越来越广泛，特别是在中药成分的体内药物分析中应用较多。

2.免疫分析法

免疫分析法包括酶免疫法、荧光免疫法、放射免疫法和化学发光免疫法等等，其原理是利用抗原－抗体反应来测定生物样品中药物的含量。免疫法的特点是具有较高的特异性和灵敏度，操作简单，测定快速，特别是样品的预处理简单，甚至不需要进行样品处理即可直接测定。但免疫法精密度较差，而且有时候会出现代谢物干扰药物分析的情况。采用免疫法分析需制备特异的抗体。这些局限性限制了免疫法在体内药物分析中的应用，目前采用免疫分析进行体内分析的药物数量较少。

3.放射性核素标记法

放射性核素标记法具有灵敏度高、简便等优点，与某些形态学技术(如组织病理切片、电子显微技术)结合，可以确定放射性示踪剂在组织器官中的定量分布。采用放射性核素标记法测定体内药物的浓度时，有时会出现药物和其代谢物都具有标记基团的情况，进而导致其特异性降低。为了保证其良好的检测特异性，应用本法测定生物样品中的药物浓度的时候最好配合色谱法进行测定。此外，采用放射性核素标记法测定需有专门的实验室，人员也必须有适当的防护措施。

4.光谱分析法

光谱分析法包括比色法、紫外－可见光分光光度法、荧光法和原子吸收光谱法等，其中原子吸收光谱法主要用于微量元素的测定及部分有机金属药物的测定。光谱法是早期体内药物分析使用的主要方法，但其选择性和灵敏度较低。随着分析技术的发展，特别是高效液相色谱技术的普及，现在光谱法在体内药物分析中的使用已经很少，仅有少数药物由于其在体内浓度较高且有较强的紫外吸收，可使用紫外分光光度法进行体内生物样品中的浓度测定。此外，原子吸收光谱法用于体内微量元素的测定。光谱法的特点是简单、快速、经济，对于条件较简陋的基层单位来说，如果该药物的体内分析对灵敏度的要求不高，那么通过对样品进行预处理，光谱法仍有用武之地。

5.生物学方法

生物学方法常能反应药效作用，其结果直观，但其精密度和特异性较差，且操作繁琐，因此这种方法很少应用于体内药物分析，只有当无法应用其他方法进行测定时，才会考虑使用生物学方法进行体内生物样品的药物测定。