体内药物分析中内标化合物的选择

高效液相色谱法中的定量方法通常包括外标法和内标法两种方法。用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法(external standard method)。外标法不需把标准物质加入到被测样品中，而是与被测样品在相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较从而求得被测组分的含量，该方法又可分为工作曲线法和外标一点法(直接比较法)。外标法具有操作简单、定量准确等优点，是药物分析工作中常用的定量方法。但是在体内药物分析过程中，由于生物样品成分复杂，内源性干扰物质多，且样品处理过程繁琐，往往导致目标待测物的损失，使用外标法测定时，即便对照品也经同样的处理过程，也会导致对照品与样品损失的百分比不同，影响最终的测定结果。此时，应考虑使用内标法进行定量。

选择合适的化合物作为待测组分的参比物质(内标物质)，定量加到样品中，依据待测组分和参比物在检测器上的响应值(峰面积或峰高)之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法(internal standard method)。该方法是一种间接或相对的校准方法，在生物样品处理(如浓缩、萃取、衍生化等)前加入内标化合物定量，不仅可以抵消仪器稳定性差异、进样量不够准确等原因带来的定量分析误差，还能抵消生物样品处理过程中引起的误差，并克服了标准曲线法中每次样品分析时色谱条件很难完全相同而引起的误差。此外，在没有标准对照物质时，内标法定量更为重要，是体内药物分析领域的重要定量方法。

使用内标法的关键是选择合适的内标物质。对于内标化合物的选择，通常考虑以下几个方面:①内标物必须是被测样品中不存在的化学组分，通常要求是纯物质;②内标物应具有良好的溶解性，在待测样品溶液中完全溶解，且不与被测样品组分发生化学反应;③内标物与被测组分具有相似的化学结构及理化性质且要求稳定，其色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰位置相近，并与所有组分及内源性干扰物质完全分离;④内标物加入的量原则上应接近于被测组分的浓度，但在体内药物分析中，通常内标物的浓度与标准曲线浓度范围的中间值相近。