内源性活性化合物的测定

由于内源性活性化合物往往参与机体重要的生理过程，其浓度的变化也与某些疾病的发病机理密切相关，因此，TDM的内涵也扩展到监测内源性活性化合物的浓度，可以为疾病的诊断和治疗提供依据。内源性活性化合物的浓度往往很低(ng·L－1～μg·L－1)，因此，测定内源性化合物的检测方法必须具有高灵敏度。常用的方法有色谱法和免疫分析法。色谱法能够将内源性活性化合物与其他内源性物质分离，再通过一定的检测手段对其进行定量分析。由于色谱法可以具备多样化的检测器，因此色谱法的检测范围不断扩大。免疫分析法通常利用抗原抗体结合反应的原理，因此，通常适用于蛋白质、多肽的测定。

实例:液相色谱－质谱联用法测定内源性活性化合物血浆中还原型谷胱甘肽的浓度

还原型谷胱甘肽(GSH)是人类细胞质中自然合成的一种肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成，含有巯基(－SH)，广泛分布于机体各器官内，为维持细胞生物功能有重要作用。临床上补充还原型谷胱甘肽往往依据医生的经验，会导致药物补充不及时或不必要的浪费。另外，对于老年人内源性GSH浓度进行监测，同时配合其他的临床指标，可以及早发现并预防某些疾病的发生，如帕金森病。

以沉淀法快速处理全血及血浆样品，采用阿昔洛韦为内标，SymmetryShieldTM RP18色谱柱，流动相为乙腈－0.1%甲酸水溶液(6 94，V V)，流速为0.3 mL·min－1，进样量为10 μL;采用电喷雾(ESI)离子源，正离子电离模式，多反应离子监测(MRM):还原型谷胱甘肽，［M+H］+m/z308.2→179.1;阿昔洛韦，［M+H］+m/z226.2→152.0。结果还原型谷胱甘肽血浆浓度线性范围为0.050～2.00 mg·L－1和全血浓度线性范围为50.0～500mg·L－1，血浆和全血中的最低定量限分别为0.050 mg·L－1和50.0 mg·L－1;提取平均回收率在90%以上，批内、批间精密度均小于15%，准确度均在85%～115%范围内。采集的全血样品在4℃可保持1 h稳定，样品处理后在－70℃可保存1周左右待测。该方法操作简单快速、灵敏度高、准确度好，临床应用方便，可用于人血浆和全血中还原型谷胱甘肽浓度的测定。