药物滥用检测方法

药物滥用检测是指通过各种分析技术手段对各种体液样品或组织(毛发、指甲)中的滥用物质进行定性定量分析。

1.药物滥用检测标本

尿液和血液是最常用的检测标本，主要原因是收集方便、标本中药物浓度较高、对分析仪器的要求较低等。近年来，头发、汗液、唾液和胎粪等开始在一些特定情况下的检测中使用，它们能提供一些独特的或额外的药物滥用信息。

尿样检测能反映药物最近的使用情况，是最常用的生物监测方法，但需要注意的事，尿样很容易被掺假或篡改，如稀释尿液、服用解毒剂、利尿药或加入混淆物质(食盐、醋、漂白剂等)来逃避药物检测，故建议在样品检测前对所有标本行完整性测试(温度、比重、肌酐浓度)以判断出潜在的无效样本。

2.样品前处理方法

样品前处理是药物滥用检测中最关键的步骤，前处理方法主要有液－液萃取、固相萃取、液相微萃取及免疫吸附提取等。一般血样通过离心，取上层清液即可用于滥用物质的提取和检测;尿样则需通过酸解、酶解，游离出滥用物质的原型物或代谢产物;毛发的预处理过程较繁琐，需要用洗洁剂清洗或超声洗去毛发表面的污染和附着物质，再选用合适的酸、碱、醇和酶水解。

3.药物滥用检测的方法

主要包括筛选和确认检测两个步骤。筛选分析要求在最短的时间内初步得到检测结果，目前普遍应用的是初步免疫筛选技术。由于免疫检测分析缺乏绝对的特异性，其筛选结果只能作为假定的阳性结果，必须再采用具有更好特异性和更高精密度和准确度的方法进行确认检测。

(1)初步免疫筛选:对滥用者分析时要先进行系统的初步筛选，免疫检测法(immunoassay，IA)是目前国际公认的筛选方法。免疫分析法利用抗原抗体反应检测标本中的微量物质，基于抗原抗体反应的特异性和敏感性，任何物质只要可获得相应的特异性抗体，即可用IA法测定。每种免疫方法都有对应的自动化仪器或与之相配套的商品化试剂盒，具有操作简便、节省时间、可用于大批量操作并且易实现自动化检测等优点。常用的免疫分析方法有放射免疫分析、酶放大免疫分析、荧光偏振免疫分析、金标免疫分析、酶联免疫吸附分析等，这些方法在其免疫特异性、灵敏度、线性、临界值附近的反应斜率以及对干扰物质的易感性等方面都不尽相同。

筛选方法具有特定的临界值，即阳性结果和阴性结果的分界线。样品中的药物浓度等于或大于临界值是为阳性，反之为阴性。合理的临界值是实现药物准确筛选的基础，临界值设定过高或过低会出现假阴性或假阳性的结果，因此筛选结果报告中必须有临界值的说明。大量实验报告表明，降低阈值能明显提高阳性率，因此降低阈值可增加检测窗口期并降低漏检率。商品化的免疫试剂盒一般把检测临界值设定在检测方法的灵敏度之上，以减少假阳性结果的可能。

临床上对免疫反应的评价要求免疫反应与生物样品中的分析物有交叉、在浓度范围内有动力学曲线，且可准确地检测药物的存在。定性检测的准确性是通过论证检测阈值浓度是否达到了需要的诊断灵敏度和诊断特异性以产生有用的预测值来进行评估。免疫分析的检测结果是药物本身代谢物和结构类似物的综合检测结果。

①放射免疫分析(RIA):将核素标记技术与抗原抗体反应结合起来的一种微量分析方法，具有灵敏度高、重复性好、样品用量少等特点，但所用试剂具有放射性且价格昂贵。

②酶放大免疫分析(EMIT):酶标药物与样品中待测药物共同竞争特异性的抗体，当酶标药物与抗体结合后，酶受到抑制而失去活性，所以样品中待测药物的浓度与反应体系中酶活力的大小成正比，通过一系列的反应进行比色转换检测待测药物的含量，作出定性或定量的分析。在药物滥用检测中，不但可以作出定性判断，还可以判断药物滥用者的滥用程度、吸食量情况和进行追踪检测等，同时客观准确，可大批量快速处理样本。EMIT反应试剂稳定安全、测定速度快，但灵敏度较低。

③荧光偏振免疫分析(FPIA):利用荧光素经单一波长(蓝光)的偏振光照射后吸收光能，释放出相应的偏振荧光，荧光偏振程度与荧光分子大小呈正比，而待测药物能与荧光标记药物竞争结合抗体，故待测药物与荧光偏振程度呈反比的关系而建立的免疫分析技术。FPIA法具有灵敏度高、精密度好、线性范围宽、测定迅速及样本用量少等优点。

④金标免疫分析(GICA):以胶体金作为示踪物，用于抗原抗体反应的新型标记免疫测定技术。GICA试剂一般为纸条形式，携带方便，简便快速，试剂稳定，适用于大面积的药物滥用筛查，GICA法是药物滥用初筛中最适合的方法，目前已广泛用于药物检测中。该法最大的特点是单一试剂，一步操作，但难于进行质量控制，因此一般只用于定性检测。检测的样品通常是尿液，而尿液的检测窗口期非常短，可能会有假阴性结果出现。

⑤酶联免疫吸附分析(ELISA):是以酶作为标记物、以抗原抗体免疫反应为基础的固相吸附测定方法。ELISA技术操作简便，无污染，可实现自动化。

(2)确认检测

免疫检测方法虽具有较高的灵敏度，但易受生物样品的影响，可能会出现假阳性结果，主要原因是免疫检测对分析物缺乏绝对特异性，且所用抗体易与抗原类似物发生交叉反应。故需对初步免疫检测的阳性结果进行确认检测。确认检测需采用不同的分析方法，具有较好的特异性，相当于或优于初步检测的灵敏度，且要具有足够高的准确度。常用的确认分析方法有气相色谱法(GC)、液相色谱法(LC)、气－质联用(GC－MS)、液－质联用(LC－MS，LC－MS/MS)、毛细管电泳法(CE)等，其中GC－MS仍是主要的药物滥用确认检测技术。但液相色谱具有取样成本低、可以分析极性和非挥发性及热不稳定性化合物且无需衍生化等优点，应用也越来越广泛。