猫爪草药材挥发性成分指纹图谱的分析方法研究

本研究采用顶空气相色谱法，在HP－INNOWAX气相色谱柱（30m×0．53mm×1．0μm）上，于150℃对猫爪草药材粉末加热60min后进行取样分析，FID检测。结果通过对10批猫爪草药材色谱图的统计分析，标定了12个共有峰，建立了猫爪草药材挥发性成分指纹图谱的分析方法。

1．仪器　气相色谱仪（Agilent－4890N），色谱柱HP－INNOWAX（PEG－20M），30m× 0．53mm×1．0μm。

2．方法

（1）供试品制备：精密称取4g药材粉末（60目）于10ml西林瓶中，密封，置烘箱中，150℃加热60min，吸取顶空气体0．5ml，注入气相色谱仪分析。

（2）色谱条件：色谱柱：INNOWAX（30m×0．53mm×1．0μm）。进样口温度：200℃。检测器温度：220℃。程序升温：初始30℃，保持5min，5℃／min升至50℃，20℃／min升至100℃，5℃／min升至180℃。气体流速：N2，30ml／min；H2，30ml／min；空气，350ml／min。在该条件下，各峰可基本达到基线分离。

（3）方法学考察

①精密度与稳定性实验：取同一批次猫爪草药材5份，按供试品制备方法制备，分别在0，1h，2h，3h，4h连续进样5次检测。以保留时间为3．4min左右的最大峰（4号峰）为参照，测定各峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明，12个共有色谱峰的相对保留时间的RSD（%）为1．47%～4．82%，相对峰面积的RSD（%）为1．79%～5．05%，符合指纹图谱的要求。

②重现性实验：取同一批次猫爪草药材5份，按供试品制备的方法制备，分别进样分析，测定各峰的相对保留时间和相对峰面积。结果表明，12个共有色谱峰的相对保留时间的RSD（%）为1．09%～3．47%，相对峰面积的RSD（%）为0．99%～4．77%，符合指纹图谱的要求。

3．指纹图谱的建立

（1）共有峰的标定按上述分析方法对10批次猫爪草药材进行分析，通过对色谱图的统计结果表明，确定12个色谱峰为10批次药材的共有峰，其总面积占总峰面积的90%以上。根据10批次样品的平均值，以保留时间为3．4min左右的最大峰（4号峰）为参照，共有峰相对保留时间为：1（0．440～0．465），2（0．643～0．647），3（0．842～0．845），4（1．000），5（1．537～1．553），6（2．220～2．396），7（2．320～2．536），8（3．831～4．205），9（4．938～5．213），10（5．159～5．347），11（5．847～5．987），12（6．151～6．533）。

（2）共有峰面积的比值以图谱中第4号峰为参照物（S），将各色谱峰峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比较，其比值为各色谱峰的相对峰面积。根据指纹图谱研究的技术要求规定，单峰峰面积占总峰面积＜10%时，仅需标定相对保留时间。在本文中统计了所有共有峰的峰面积，结果见表2－5。

表2－5　猫爪草样品的图谱中各色谱峰的相对峰面积

4．讨论　对色谱柱的考察结果表明，在所选的HP－5，HP－35及HP－INNOWAX　3种色谱柱中，以HP－INNOWAX气相色谱柱比较适宜本药材中成分的分离。

对药材粉末粒度的考察结果表明，60目药材粉末比40目药材粉末所得色谱峰数明显要多，80目药材粉末和60目药材粉末所得色谱峰数相差不大，故选择粉末粒度为60目。

对药材取样量的考察结果表明，药材取样量为4g时，所得色谱峰数较多且峰面积与取6g时相差不大，故选择药材取样量为4g。

对加热温度的考察结果表明，150℃加热检出的峰数较多，峰面积较大，故选择加热温度为150℃。

对加热平衡时间的考察结果表明，30min和45min时的峰数较少，而90min与60min的峰数相差不多，峰面积相差不大，故选择平衡时间为60min。

本文仅研究了建立指纹图谱的分析方法，通过对10批样品色谱图统计分析，标定了12个共有峰，但在对其峰面积的统计分析中，可发现样品质量差异很大，因此必须有待与药效学试验相结合，在确定产地、采收时间及加工工艺等条件后，才能建立对质量标准有指导意义的猫爪草顶空气相指纹图谱。