猫爪草多糖部位分子量分布范围的研究

本节用凝胶HPLC法测定了猫爪草多糖部位的分子量分布，其目的是研究猫爪草多糖部位的分子量分布范围，为进一步确定猫爪草多糖的质量检测标准作准备。

（一）主要仪器和试剂

Waters515GPC凝胶色谱仪、色谱柱为G－3000，TSKG－3000Pwxl，Shimadzu RID－2A示差折光检测器、CBL Model　100恒温柱箱、ALLChrom plus Client／Server SEC专用软件、猫爪草纯化多糖部位（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，自制）、标准葡聚糖Dextran－500，T－70，T－40，T－10。葡萄糖、去离子水、2．84%Na2SO4溶液等。

（二）方法与结果

1．色谱条件　Waters515GPC凝胶色谱仪、示差折光检测器、分子量排阻范围3×105；流动相为2．84%Na2SO4溶液，流速：0．5ml／min，压力为21bar，色谱柱为G－3000，TSKG－3000Pwxl，柱温：35℃；进样量：20μl；灵敏度：0．5AUFS。

2．标准曲线的制备　取已知相对分子量的标准多糖Dextran各50mg，置5ml量瓶中，分别加流动相稀释至刻度。按“色谱条件”分别精密吸取各溶液5μl注入高效液相色谱仪。以相对分子量的对数（logY）为纵坐标，保留时间（T）为横坐标，进行回归分析，绘制标准曲线。回归方程为：log（M）＝－0．312　7T＋8．363　4，r＝0．999　3（n＝5），相对分子量在180～41　000范围内内呈良好的线性关系。结果见图3－21。

图3－21　GPC校正曲线

3．猫爪草多糖部位的相对分子质量测定　精密称取猫爪草多糖纯化部位（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）各5mg，置5ml量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。按“色谱条件”，分别精密吸取各溶液5μl注入GPC凝胶色谱仪。以标准曲线法计算各纯化部位的分子量的对数值，求出分子量。各纯化部位（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）的相对分子量的分子量范围见表3－39。

表3－39　猫爪草多糖部位的分子量范围测定结果

（1）峰位分子量作为相对分子量测定结果的参考数值

实验中将猫爪草多糖4个纯化部位（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）的相对分子量的分子量范围进行了测定，结果多为分子量为1　000以下的低分子量寡糖。部位Ⅲ有3万以上、1万～2万的多糖，但含量甚微。各部位的活性及猫爪草多糖有效部位的确定有待于药效学的进一步试验作出结论。