本实验用UV法和IR法测定了猫爪草多糖纯化部位Ⅰ~Ⅺ的吸收光谱曲线,为多糖部位的纯度评价和结构鉴定提供了依据。
(一)主要仪器和试药
双光束紫外可见分光光度计、红外分光光度计、猫爪草多糖有关部位Ⅰ~Ⅸ。
(二)方法与结果
1.多糖有关部位的UV光谱测定 分别称取多糖部位Ⅰ~Ⅸ约2mg,分别置10ml量瓶中,用蒸馏水溶解并稀释至刻度,作为供试品溶液。取供试品溶液,以水作为空白对照,测定各多糖部位的紫外吸收曲线,UV光谱图显示,各部位均在接近200nm处有紫外吸收,说明产生紫外吸收的物质结构中含有单双键,但不具有共扼结构。从图谱上看出这9个样品的吸收曲线差异较小,显示了这个样品相似性较高。
2.多糖有关部位的IR光谱测定 采用KBr压片测定多糖部位Ⅰ~Ⅺ的IR光谱。
IR图显示,在3 200~3 500cm-1有较强的宽峰,证明有羟基且形成了氢键缔合,在900~1 200cm-1有较强的νC-O峰,在2 900cm-1处显示弱的νC-H峰,在1 650cm-1左右有较强的νC-O峰弯曲振动。各个多糖部位的红外光谱图均显示糖类特征。
3.多糖有关部位的IR指纹图谱相似性比较 比较多糖部位Ⅰ~Ⅺ的相似性和差异性,实验中对11个样品进行了共有峰率和变异峰率双指标序列分析,结果11个多糖部位的共有峰率大多在50%以上,其中最大共有峰率达到84%,而变异峰率相对来说大多比较小,从而可以说明在11个多糖部位中相似度较高。
实验过程测定了多糖Ⅰ~Ⅺ,11个纯化部位的UV和IR吸收光谱曲线,从图谱可看出11个纯化部位有较大的相似性。
各个部位均为两种(以上)不同分子量多糖的混合物,糖类的分子结构决定了多糖具有特征的IR光谱吸收光谱,和紫外吸收光谱。本节用UV法和IR法测定了猫爪草多糖部位Ⅰ~Ⅺ的吸收光谱曲线,为多糖部位的纯度评价和结构鉴定提供了依据。
本实验从猫爪草中分离、纯化得到分子量为1 000Da以下的低分子糖,具有明显的体内外诱生TNF的作用。这就为猫爪草抗肿瘤有效成分的筛选及抗肿瘤作用机制,提供了一定的理论依据。
有关猫爪草多糖的研究,曾有学者从猫爪草中分离、纯化得到相对分子量为2.3×104的多糖。此实验得到的多糖,相对分子量的分布范围1 000以下,1万以上的含量甚微。可能主要与药材的来源不同有关。
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