骨髓细胞学检查主要是通过观察骨髓造血功能状态、骨髓细胞形态、数量等方面的变化，协助血液系统疾病及某些代谢性疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察及预后判断等。
（一）骨髓涂片检查
1．骨髓取材 取材部位宜选择容易穿刺且造血旺盛的骨髓腔，而且要避开重要脏器。一般年长儿及成年人依次选择髂后上棘或髂前上棘、胸骨、棘突；2岁以下婴幼儿可选胫骨上端；较大儿童与成年人相同。吸取骨髓液量一般不超过0．2ml，迅速置于载玻片上，涂片3～5张。若需进行细胞化学染色检查，可再推3～5张。取材的部位不同，细胞的数量、组成可能有一定的差异，从而对检查的结果产生影响。取材过程中，若取材不佳或干抽，可换部位重新穿刺。
2．骨髓涂片和染色 将骨髓液置于载玻片上后，要迅速推片以防骨髓液凝固。但推片的过程要缓慢，且涂片不能太厚，头、体、尾应分明，以便于观察不同类型的细胞。涂片后为避免细胞变形，要立即挥干。取材良好的骨髓片，片膜粗糙，骨髓小粒易见。之后，以瑞氏和吉姆萨混合染色法染色，涂片干燥后镜检。
ALL分3个亚型，即L1、L2、L3；AML分为7个亚型，即M1、M2、M3、M4、M5、M6及M7。
（二）骨髓细胞化学染色
1．过氧化物酶染色（POX） 见彩图6、彩图7。
（1）参考范围：细胞中无蓝颗粒者为阴性反应，出现细小颗粒而分布稀疏者为弱阳性。颗粒略粗，分布较密集者为阳性反应；颗粒粗大，呈蓝黑色，充满胞质中为强阳性反应。
（2）临床意义：主要用于急性白血病类型鉴别。急性粒细胞白血病晚期的原粒细胞过氧化酶染色阳性，颗粒较少，较大。急性单核白血病细胞阴性或弱阳性，颗粒细小，稀少。粒单型急性白血病细胞除了阴性或弱阳性外，尚可有粒细胞系统阳性颗粒，在分类困难时可作参考。急性颗粒增多早幼粒白血病细胞呈强阳性反应。急性淋巴白血病细胞呈阴性反应。过氧化酶尚有助于某些小原粒细胞与原淋巴细胞的区别，早幼粒细胞与恶性组织细胞的鉴别，前者为阳性，后者可为阴性。
2．苏丹黑B染色（SB） 见彩图8。
（1）参考范围：各类血细胞SB染色显示的结果与POX染色大致相同。粒细胞系自早幼粒细胞起至成熟中性粒细胞，阳性反应随着细胞的成熟逐渐增强。单核细胞系大多呈弱阳性反应。淋巴细胞系呈阴性反应。
（2）临床意义：本染色法也用于急性白血病类型的鉴别，其意义与POX染色反应相同。急性粒细胞白血病时，白血病性原粒细胞就可出现阳性反应，故SB染色较POX染色反应更为敏感。
3．中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 见彩图9。
（1）参考范围：碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞（分叶核及杆状核），其他血细胞均呈阴性反应。阳性反应为胞质中出现灰色到棕黑色颗粒，反应强度分为5级，即“－”“1＋”“2＋”“3＋”、“4＋”，反应结果以阳性反应细胞百分率和积分值来表示。血涂片染色后，在油镜下，观察100个成熟中性粒细胞，阳性反应细胞所占百分率即为阳性率；对所有阳性反应细胞逐个按反应强度分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值。成年人NAP阳性率10%～40%，积分值40～80（分）。由于各实验室条件不同，参考值也有差异，应建立本实验室的参考值。
（2）临床意义
①NAP增高：见于严重的化脓性感染、类白血病反应、真性红细胞增多症、骨髓纤维化、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤、再生障碍性贫血及原发性血小板减小性紫癜等。
②NAP减低：见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、阵发性夜间血红蛋白尿（PNH）及恶性组织细胞病等。
③NAP用于下列疾病的鉴别诊断：慢性粒细胞白血病与类白血病反应的鉴别；PNH与再生障碍性贫血的鉴别；急性淋巴细胞白血病和急性粒细胞白血病的鉴别。
4．糖原染色（PAS） 见彩图10、彩图11。
（1）参考范围：胞质中出现红色者为阳性反应。阳性反应物可呈颗粒状、小块状或弥漫均匀红色。PAS反应的阳性程度通常以强阳性、阳性、弱阳性和阴性来表示，也有用阳性百分率（观察同一类型细胞的阳性细胞率）和积分值来表示。
正常血细胞的PAS染色反应：粒系细胞中原粒细胞为阴性反应，自早幼粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，并随细胞的成熟，阳性反应程度渐增强；单核细胞呈弱阳性反应；淋巴细胞大多呈阴性反应，少数可呈弱阳性反应；幼红细胞和红细胞均呈阴性反应；巨核细胞和血小板均呈阳性反应，巨核细胞的阳性反应程度随细胞的发育成熟而增强，成熟巨核细胞多呈强阳性反应。
（2）临床意义
①协助红血病、红白血病的诊断以及与其他类型贫血的鉴别：幼红细胞出现PAS强阳性反应可见于红血病和红白血病，也可见于部分严重缺铁性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血及一些铁粒幼细胞贫血。正常人、再生障碍性贫血、巨幼细胞贫血的有核红细胞及成熟红细胞均无阳性反应。可利用此反应来鉴别巨幼细胞贫血与红白血病。
②有助于急性白血病的类型鉴别：急性粒细胞白血病细胞PAS反应阴性或弱阳性反应，常呈细颗粒状或均匀淡红色；急性单核细胞白血病细胞PAS反应呈弥漫性阳性而胞质边缘或伪足处阳性颗粒稍粗；急性淋巴细胞白血病（L1、L2型）的PAS反应呈粗颗粒，甚至大块状，胞质背景清晰。
③鉴别特殊细胞：Reed－Stemberg细胞阴性或弱阳性，而不典型巨核细胞为强阳性；Niemann－Pick细胞阴性或胞壁有些阳性，而Gaucher细胞为强阳性；正常淋巴细胞为阴性或弱阳性反应，而慢性淋巴细胞白血病、淋巴肉瘤细胞一般为阳性或强阳性；腺癌细胞呈阳性反应，骨髓转移时PAS染色可帮助与白血病细胞鉴别。
5．特异性酯酶 氯乙酸AS－D萘酚酯酶染色（AS－DCE），见彩图12。
（1）参考范围：胞质中出现红色沉淀者为阳性反应。此酶主要存在于粒系细胞中，原粒细胞为阴性反应或弱阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，早幼粒细胞呈强阳性反应，酶活性随细胞的成熟而逐渐减弱。嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、浆细胞、幼红细胞一般均呈阴性反应，个别单核细胞可呈弱阳性反应。
（2）临床意义
①急性粒细胞白血病时，原始和幼稚细胞呈强阳性反应，成熟粒细胞酶活性下降或消失。单核细胞白血病时酶反应基本阴性。慢性粒细胞白血病急粒变时酶活性增强。因此，可用于上述3种白血病的鉴别。
②嗜碱性粒细胞与肥大细胞的鉴别：前者AS－DCE呈阴性反应，后者呈阳性反应。
③AS－DCE阳性反应几乎仅仅出现在粒细胞系统，因此较POX染色更具特异性，故又称为“粒细胞酯酶”。
6．非特异性酯酶染色法（NSE）
（1）中性非特异性酯酶染色法：血细胞的非特异性酯酶及其同工酶种类很多，均作用于短链脂肪酸、水解醇和酚的羧酸酯。α－或β－醋酸萘酚在非特异性酯酶催化下水解，产生萘酚，再与重氮盐耦联，生成不溶性棕黑色絮状物沉淀，定位于胞质。
①正常血细胞染色反应：原、幼单核细胞及单核细胞为阳性反应；巨核细胞、血小板均呈阳性反应；其他血细胞呈阴性或弱阳性反应，其中单核细胞阳性反应可被氟化钠（NaF）抑制。
②临床意义：主要用于急性白血病的类型鉴别。急性单核细胞白血病中原、幼单核细胞及单核细胞呈阳性反应且能被NaF抑制；急性早幼粒细胞白血病早幼粒细胞亦呈阳性反应，但不能被NaF抑制；急性淋巴细胞白血病多呈阴性反应，有时T细胞型急性淋巴细胞白血病中的原始细胞可呈阳性反应，但不能被NaF抑制；急性粒细胞白血病原始粒细胞呈阴性反应，个别可呈阳性反应，但不能被NaF抑制。
（2）酸性非特异性酯酶染色法：在酸性环境中，α－醋酸萘酚被醋酶催化水解，产生α－萘酚，再与六偶氮副品红（对品红）耦联，生成不溶性棕红色颗粒或弥散絮状沉淀，定位于胞质。
①正常血细胞染色反应：酸性非特异性酯酶主要分布在T淋巴细胞和单核细胞中，粒细胞、B淋巴细胞、红系细胞、巨核细胞、血小板中较少。
②临床意义：用于急性白血病类型的鉴别，同α－NAE，有助于区分T、B淋巴细胞，前者呈阳性反应，后者多呈阴性反应。
（3）碱性非特异性酯酶－α－丁酸萘酯酶染色法：α－丁酸萘酯在单核细胞酯酶作用下，水解产物α－萘酯与染料结合成红色物质，定位于细胞质内。
①正常血细胞染色反应：单核细胞和巨噬细胞强阳性；巨核细胞、淋巴细胞及嗜酸粒细胞弱阳性；粒细胞一般阴性（单核细胞被NaF抑制，粒细胞不被抑制）。
②临床意义：用于急性白血病的鉴别诊断。如急性单核细胞白血病中白血病细胞呈阳性反应，且能被NaF抑制；恶性组织细胞增生症中的异常组织细胞、毛细胞白血病中毛细胞亦呈阳性反应，但不能被NaF抑制；急性粒细胞白血病中的原始粒细胞呈阴性反应或弱阳性反应；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞一般呈阴性反应。
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