【原理】苏丹黑B(Sudan black B,SB)是一种能溶解于脂肪中的重氮染料,使细胞内的中性脂肪、磷脂和类固醇等含脂结构呈棕黑色或黑色颗粒而显示出来。
【试剂】
1.40%甲醛溶液或10%甲醛生理盐水(可省略)。
2.苏丹黑B备用液:取苏丹黑B粉剂0.6g加入200ml无水乙醇中用研钵慢慢研溶,并在室温下放置1~2d,待充分溶解,置冰箱可保存1年。
3.缓冲液:苯酚16g溶于无水乙醇30ml中,磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)0.3g溶于蒸馏水100ml中,两份溶液相混即成缓冲液,可保存1年。
4.苏丹黑B染色液:以苏丹黑B备用液30ml,缓冲液20ml,两液混合后过滤即成,一般可保存6~12个月。
5.70%乙醇(或无水乙醇)。
6.瑞氏染液。
【操作】
1.血片或骨髓片干后,用40%甲醛液或10%甲醛生理盐水固定10min,水洗,待干(可省略固定,将血片或骨髓片直接放入苏丹黑B染液中)。
2.浸入苏丹黑B染色液中,置37℃水浴箱中,温育30~60min。
3.取出后立即用70%乙醇(或无水乙醇)漂洗涂片约10s,使染料冲洗干净,水洗,待干。
4.瑞氏染液复染20~30min,水洗,待干,用油镜镜检。
【注意事项】
1.苏丹黑B备用液和缓冲液要避光、加盖密封保存,可保存6~12个月。染色欠理想时,应及时更换。
2.冬天或从冰箱取出的染色液应先放37℃水浴箱中预温10min,再进行染色。
3.70%乙醇(或无水乙醇)脱色时,时间不宜过长,否则可将阳性颗粒脱掉。
4.放置时间较长的涂片,不宜做POX染色,应选用SB染色,因过氧化酶易失活而脂类较稳定。新鲜涂片最好与POX染色同步进行。
【结果】
1.结果判断 在胞质内出现棕黑色或黑色颗粒为阳性反应。阳性程度判断标准如下。
阴性(-):胞质内无棕色颗粒。
弱阳性(+):胞质内有细小、分布稀疏的棕黑色颗粒。
阳性(++):胞质内的黑色颗粒粗细不一,量较多,分布不均。
强阳性(+++):胞质内的黑色颗粒粗大,充满整个胞质,常覆盖到核上。
2.结果报告 报告原始细胞的阳性程度或阳性百分率。
【正常血细胞的染色反应】染色反应结果基本与POX染色一致。
【临床意义】与POX染色基本相似,但戈谢细胞和尼曼-匹克细胞POX染色阴性,而SB染色阳性。
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