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骨髓活检标本的制备

时间:2023-04-30 理论教育 版权反馈
【摘要】:固定液首选PCF固定液,即重铬酸钾2.5g、氯化汞5g,用蒸馏水配成100ml的混合液,固定骨髓组织时与40%甲醛液按4:1混合,一般固定12~48h。PCF固定液可充分固定中性粒细胞的颗粒,有利于区别粒细胞和单核细胞,对其他细胞的固定效果也较好,缺点是穿透力弱,固定时间长,染色时要脱去汞色素。因PCF固定液毒性大,临床上也用乙醇甲醛固定液来固定骨髓组织。

骨髓活检标本制备的主要程序包括取材、固定、脱钙、脱水、塑料包埋、切片及染色。

(一)骨髓活检标本取材与固定

骨髓活检取材常采用髂后上棘,皮肤经消毒、局部麻醉后,将具有内芯的手柄插入针座和针管中,右手持活检针,垂直骨面以顺时针方向旋转进针至一定深度使活检针固定,握住手柄,拔出针芯,在针座后端连接1.5cm或2.0cm接柱,再插入针芯,按顺时针方向继续进针,针管前端的沟槽可将骨髓组织断离;拔出活检针,取出针芯及接柱,再插入针芯推出骨髓组织,标本立即放入固定液送检。

固定液首选PCF固定液,即重铬酸钾2.5g、氯化汞5g,用蒸馏水配成100ml的混合液,固定骨髓组织时与40%甲醛液按4:1混合,一般固定12~48h。PCF固定液可充分固定中性粒细胞的颗粒,有利于区别粒细胞和单核细胞,对其他细胞的固定效果也较好,缺点是穿透力弱,固定时间长,染色时要脱去汞色素。其次是Bouin固定液(饱和苦味酸水溶液75ml,40%甲醛溶液25ml,冰醋酸5ml)穿透力强,固定均匀迅速,一般固定30~60min,但其对红系细胞和粒系细胞胞质固定效果差。因PCF固定液毒性大,临床上也用乙醇甲醛(95%乙醇溶液90ml,40%甲醛溶液10ml)固定液来固定骨髓组织。

(二)标本制片与染色

骨髓组织用5%~10%的硝酸脱钙后脱水,再用塑料包埋技术制成2~3μm的半薄切片,这样处理的标本细胞收缩少,切片薄而利于观察细胞内部结构。通常采用苏木素-吉姆萨-伊红(HGE)染色,如有需要还可进行一些特殊染色,如Gomori网状纤维染色、Masson胶原纤维染色,也可进行组织化学染色,如铁染色、过碘酸-雪夫(PAS)染色等。

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