（一）血清铁蛋白测定
血清铁蛋白测定（measurement of serum ferritin，SF）多采用放射免疫分析法、电化学发光免疫分析法，现介绍电化学发光免疫分析法。
【原理】一定量生物素化抗铁蛋白单克隆抗体（一抗）和三联吡啶钌标记的抗铁蛋白单克隆抗体（二抗），加入待检血清，血清中的铁蛋白与双抗体结合，形成抗原抗体复合物，使与链霉亲合素包被的磁性微粒结合，结合的磁性微粒被工作电极下的磁铁吸附于电极表面，未结合的游离物均被洗弃，检测电极通电产生化学发光，产生的光子强度与抗原抗体复合物的量呈线性关系，仪器自动从标准曲线中得出检测结果。
【试剂】商品试剂盒
1.标准抗体。
2.生物素化抗铁蛋白单克隆抗体。
3.三联吡啶钌标记的抗铁蛋白单克隆抗体。
4.含三丙胺的缓冲液。
5.维生素C 2.52mol/L。
6.链霉亲合素包被的磁性微粒。
【操作】
1.采患者空腹静脉血，制备血清。
2.在全自动电化学发光免疫分析仪上进行测定，包括加样、分离、搅拌、温育、测定、计算结果、打印报告等整个操作过程严格按仪器操作规程进行。
【注意事项】
1.避免标本溶血，因较重的溶血可使结果偏高。
2.试剂中含叠氮钠防腐剂，不可入口，避免接触皮肤及黏膜。
【参考值】男性15～200μg/L，女性12～150μg/L。
【临床意义】
1.降低 常见于缺铁性贫血早期、失血、慢性贫血和营养缺乏等。
2.增高 见于铁粒幼细胞贫血、肝疾病、血色病、过量输血、急性感染、恶性肿瘤等。
（二）血清转铁蛋白测定
血清转铁蛋白测定（measurement of serum transferrin，Tf）常用的测定方法有免疫散射比浊法、免疫透射比浊法、放射免疫法和电泳免疫扩散法等。
【原理】免疫散射比浊法：利用抗人转铁蛋白抗体与血清中的转铁蛋白结合形成抗原抗体复合物，其散射光的强度与抗原抗体复合物的浊度成正比，与标准曲线比较，即可计算出转铁蛋白浓度。
【试剂】商品试剂盒
1.转铁蛋白胶乳试剂 包括试剂1（缓冲液）和试剂2（羊抗人转铁蛋白血清）
2.转铁蛋白标准液
【操作】
1.取试管8只，标明标准管6支、空白管1只、测定管1只。6只标准管的浓度分别为0g/L、0.46g/L、0.93g/L、1.84g/L、3.69g/L、7.00g/L，按表6-1操作。
2.各管混匀，37℃10min。
3.在免疫散射比浊仪波长570nm处比色测定散射光强度。
4.测定管与标准管散射光强度减去空白管散射光强度，以标准浓度为横坐标，以散射光强度为纵坐标，制作标准曲线，根据标准曲线可得出检测血清转铁蛋白浓度。
表6-1 血清转铁蛋白测定的操作步骤
若在全自动生化分析上测定可按仪器说明书和试剂盒的操作方法进行操作。
【注意事项】
1.要用血清或肝素、EDTA盐抗凝血浆检测，标本不可反复冻融，不能被污染。
2.试剂中含叠氮钠防腐剂，不可入口，避免接触皮肤及黏膜。
【参考值】2.0～3.6g/L。
【临床意义】
1.转铁蛋白增高 见于缺铁性贫血、慢性失血和妊娠。
2.转铁蛋白降低 见于急性白血病、肾病综合征、肝硬化、恶性肿瘤、炎症等。
（三）血清铁测定（略，见《生物化学检验技术》）
（四）血清总铁结合力测定
血清总铁结合力（total iron binding capacity，TIBC）是指血清中转铁蛋白全部与铁结合后铁的总量，可反映血清中转铁蛋白的水平。
【原理】血清中加入已知过量的铁标准液，使血清中转铁蛋白与铁结合达到饱和，再用吸附剂（轻质碳酸镁）除去多余的铁，以测定血清铁的方法测定铁的含量，即为总铁结合力。总铁结合力减去血清铁即为未饱和铁结合力（UIBC）。血清铁与血清总铁结合力的百分比称为转铁蛋白饱和度（transferrin saturation，TS）。
【试剂】
1.铁标准液（17.91μmol/L） 取铁标准液（1.791mmol/L）1ml，用双蒸馏水稀释至100ml。
2.碳酸镁[MgCO3]4Mg（OH）2·5H2O。
3.0.5mol/L醋酸缓冲液 0.5mol/L醋酸液150ml加0.5mol/L醋酸钠液350ml混匀，调至pH为5.0。
4.显色剂 2，2′-联吡啶0.375g，羟胺盐酸盐0.5g，以0.5mol/L醋酸缓冲液溶解并稀释至500ml。
【操作】
1.取患者血清0.5ml，加入铁标准液0.5ml，混匀放置5min，加碳酸镁粉剂20mg，混匀室温放置30min，每10min混匀1次。
2. 2000r/min，离心10min，吸取上清液按表6-2操作测定血清铁含量。
3.混匀，沸水浴中5min，冷却后离心，取上清液，波长530nm比色。
表6-2 血清铁测定的操作步骤
4.计算：总铁结合力（μmol/L）＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×17.91×2
转铁蛋白饱和度（%）＝（血清铁/总铁结合力）×100
式中17.91为标准管的浓度，2为标本的稀释倍数。
【注意事项】
1.标本可用肝素抗凝，应避免溶血，以免血红蛋白铁混入。
2.所用器材应确保无铁剂污染，用双蒸馏水或去离子水配制试剂。
3.离心、煮沸时间要准确，煮沸离心后若出现上清液浑浊，可加氯仿1.0ml振荡片刻，离心再取上清液比色。
【参考值】男性：50～77μmol/L，女性：54～77μmol/L。
【临床意义】
1.增高 常见于缺铁性贫血、急性肝炎、红细胞增多症等。
2.降低或正常 见于铁粒幼细胞贫血、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、慢性感染、溶血性贫血、肾病综合征等。
（五）血清可溶性转铁蛋白受体测定
血清可溶性转铁蛋白受体测定（soluble serum transferring receptor，s-TfR）常采用酶联免疫双抗体夹心法。
【原理】包被于固相上的特异多克隆血清转铁蛋白受体抗体与待测血清中转铁蛋白受体结合，形成抗原抗体复合物，再加入酶标记的特异性多克隆转铁蛋白受体抗体，与抗原抗体复合物进行特异性结合，洗去未结合的酶标记的多克隆抗体，加入底物显色剂，其颜色深浅与转铁蛋白受体的量成正比。
【试剂】成品的商品试剂盒
1.辣根过氧化物酶标记的多克隆转铁蛋白受体抗体。
2.转铁蛋白受体标准液。
3.底物1：四甲基苯烯丁。
4.底物2：3%过氧化氢溶液。
5.终止液：0.5mol/L硫酸溶液。
6.洗板液。
【操作】
1.在多克隆白转铁蛋白受体抗体包被的反应板上，分别加入不同浓度的标准液、待检血清100μl，密封，37℃水浴箱中孵育2h。
2.去掉上清液，用洗板液清洗5次，在吸水纸上拍干。
3.每孔加辣根过氧化物酶标记的多克隆转铁蛋白受体的抗体100μl，密封，37℃水浴箱中孵育2h。
4.去掉上清液，用洗板液清洗5次，在吸水纸上拍干。
5.每孔加底物1和底物2各50μl，室温放置30min。
6.每孔加终止液100μl，在酶标仪上波长630nm比色。
7.制作标准曲线，在标准曲线中查出检测结果。
【注意事项】
1.标本采集后应迅速分离血清或血浆。
2.清洗板时要清洗干净，避免交叉污染。
3.标本不能溶血，溶血可使结果偏高。
【参考值】12.5～26.5nmol/L，各实验室应根据试剂盒说明书上的参考值进行判断。
【临床意义】
1.升高：常见于缺铁性贫血和溶血性贫血。
2.降低：见于再生障碍性贫血、慢性病性贫血、肾衰竭等。
3.用于EPO治疗各类贫血的疗效观察和剂量调整、观察骨髓移植后的骨髓重建情况及肿瘤化疗后骨髓抑制和恢复情况。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
