（一）纤溶酶原活性检测
【原理】纤溶酶原活性（plasminogenactivity，PLG）检测常用发色底物法。纤溶酶原在尿激酶作用下转变为纤溶酶，纤溶酶作用于发色底物S2251的酰胺键，释放对硝基苯胺而显色，颜色深浅与纤溶酶活性呈正相关。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.标准血浆用缓冲液进行1:10、1:20、1:40、1:80稀释，各稀释度取50μl 加入96孔的酶标板中；将标本按1:10稀释加50μl酶标板孔中。
2.每孔加链激酶50μl，37℃温育30min。每孔加发色底物20μl和缓冲液100μl，混匀后，37℃温育60min。加50%醋酸50μl，终止反应。
3.测定吸光度：在波长405nm酶标仪上，用空白管调零点，测定各管A值。
4.以标准品中PLG的活性作横坐标，1:10标准血浆为100%活性，以吸光度为纵坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线。
5.以待测样品的吸光度在标准曲线上查得PLG活性，再乘以稀释倍数，得出PLG活性。
【注意事项】
1.采血时避免止血带束缚过久，防止溶血或凝血。
2.血标本应用专用试管或枸橼酸盐抗凝，并立即送检，不可冷冻保存。
3.溶栓治疗药物可造成PLG活性下降。口服避孕药可轻度提高PLG活性。
【参考范围】57.72%～113.38%。
【临床意义】
1.减低 见于血栓前状态和血栓性疾病。
2.增高 常见于原发性纤溶症、DIC、肝硬化、重症肝炎、肝切除、门脉高压、大手术后等。
（二）组织型纤溶酶原激活物抗原检测
【原理】组织型纤溶酶原激活剂抗原（t-PA：Ag）测定常用双抗夹心ELISA法。将纯化的t-PA单克隆抗体包被在固相载体上，然后加待检标本，形成抗原-抗体形成复合物。此复合物再与辣根过氧化物酶标记的t-PA单克隆抗体起反应，形成双抗体夹心免疫复合物，洗涤后加入底物，呈显色反应，其反应颜色深浅与标本中t-PA含量呈正比关系。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.血浆制备：枸橼酸钠抗凝（按以血液与抗凝剂V/V9:1抗凝），血浆1份加稀释缓冲液5份，如果估计t-PA值增高，血浆可作1:10稀释。
2.包被、加样、酶标、显色、终止、标准曲线制作、计算等按照说明书要求。
【参考范围】1～12μg/L。
【临床意义】
1.t-PA含量增高 表明纤溶活性亢进，见于原发性纤溶和继发性纤溶。也见于应用纤溶酶原激活剂类药物。
2.t-PA含量下降 表示纤溶活性减弱，见于高凝状态和血栓性疾病。也见于高脂血症、手术损伤等。
（三）组织型纤溶酶原激活物活性
【原理】测定组织型纤溶酶原激活物活性（tissue plasminogen activator activity，t-PA:A）用发色底物法。受检血浆加入过量纤溶酶原和纤维蛋白共价物，血浆中的t-PA吸附于纤维蛋白上，并使纤溶酶原转变成纤溶酶，纤溶酶使发色底物S2251释放出对硝基苯胺而显色，显色的深浅与受检血浆中t-PA的含量呈正相关。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.标准曲线制备
（1）t-PA标准品：用缓冲液4.0ml溶解，再稀释100倍，此时t-PA活性2.5×10-2U/ml，按表16-8加入到酶标板中。
（2）将发色底物、共价物、纤溶酶原分别用缓冲液2.0ml溶解，每孔各加100μl，37℃湿盒温育150～180min。
（3）加终止液20μl，以1号管调零点，在酶标仪上测定405nm时各管吸光度。并且以吸光度为纵坐标，以t-PA:A为横坐标，绘制标准曲线。
表16-8 t-PA标准品孔稀释
2.标本测定
（1）0.109mol/L枸橼酸钠（1:9抗凝）抗凝血浆200μl，加等体积的酸化液混匀，备用。
（2）将酸化的待测血浆用缓冲液再稀释15倍，取100μl加入到酶标板中。余下操作同上面标准曲线制备（2）和（3）。
（3）待测样品t-PA活性可从标准曲线上查出，乘以15，再乘以2×1.1（如果用固体肝素抗凝，则不用乘以1.1）。
【注意事项】
1.采血后尽快进行标本检测。
2.冷冻标本融化后如果出现絮状沉淀，应分散均匀。
3.本法的线性范围为0～0.025U/ml，所以正常血浆标本稀释30倍应在此范围，如果待检标本显色深，应将标本做适当稀释。
4.保温时间应视标准品显色深浅做适当调整。
【参考范围】0.3～0.6U/ml。
【临床意义】同组织型纤溶酶原激活物抗原检测。
（四）血浆鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）
【原理】血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（plasma protamine paracoagulation test，3P试验），在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出肽A、B后转变为纤维蛋白单体（FM），FM与纤维蛋白降解产物（FDP）形成可溶性的复合物。硫酸鱼精蛋白能使复合物中的FM游离，FM再自行聚合成肉眼可见的纤维状、絮状或胶胨状，反映FDP（尤其是碎片X）存在。
【器材】37℃水浴箱，离心机，试管等。
【试剂】10g/L硫酸鱼精蛋白溶液和阳性对照血浆。
【操作】
1.取0.109mol/L枸橼酸钠抗凝（以血液与抗凝剂V/V9:1），制备贫血小板血浆，取0.5ml于试管中，置37℃水浴3min。
2.取阳性对照血浆0.5ml于试管中，置37℃水浴3min。
3.分别加入10g/L硫酸鱼精蛋白溶液0.05ml混匀，置37℃水浴箱中15min，观察结果。
4.结果判断。阴性：血浆透明、清晰、无不溶解产物产生。弱阳性：细颗粒沉淀。阳性：粗颗粒沉淀。强阳性：纤维蛋白丝、絮状或胶胨形成。
【注意事项】
1.不能用EDTA盐、肝素或草酸盐抗凝血浆。
2.抽血顺利、抗凝均匀、立即送检、及时观察。
3.严格控制水浴箱的温度和放置时间。
【参考范围】正常人为阴性。
【临床意义】
1.阳性 见于急性DIC早、中期，外科大手术后、肝病变、严重感染（尤其是大叶性肺炎）、人工流产、分娩等。
2.阴性 正常情况或者DIC晚期、原发性纤溶。
（五）血浆纤维蛋白（原）降解产物（FDP）检测
【原理】常用胶乳凝集法。以抗纤维蛋白（原）降解产物（FDP）特异性抗体包被胶乳颗粒悬液，与待检血浆混合，当标本中含有FDP，便与胶乳颗粒上的抗体结合而发生凝集反应。根据被检血清的稀释度可计算出血清纤维蛋白（原）降解产物的含量。
【器材】试管、刻度吸管、微量加样器、离心机、秒表等。
【试剂】
1.0.109mol/L枸橼酸钠溶液。
2.血清FDP胶乳凝集测定试剂盒。
【操作】
1.标本采集 静脉采血1.8ml，0.109mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml抗凝，转速3000r/min，离心20min，分离血浆。
2.测定 微量加样器吸取20μl乳胶试剂，置于乳胶反应板上，再加入待检血浆20μl，混匀，轻轻摇动3～5min。
3.结果观察 明显均匀的凝集颗粒为阳性；无凝集颗粒为阴性。
4.阳性结果时，用缓冲液将待检血清倍比稀释 1:2、1:4、1:8、1:16等，按上述方法进行检测，发生凝集反应最高稀释倍数作为终点。
5.计算 血清中FDP含量为临界检出阈值5mg/L×发生凝集反应最高稀释倍数。
【注意事项】
1.标本在2～8℃保存24h，-20℃保存1个月。
2.试剂盒在2～8℃保存，切勿冻结。实验前平衡至室温，用前摇匀。
3.高浓度的类风湿因子可能致结果假阳性。
【参考范围】FDP≤5mg/L。
【临床意义】FDP增高：见于原发性纤溶亢进、高凝状态、DIC、肝疾病、器官移植、溶栓治疗以及血栓性疾病所致的继发性纤溶亢进。
（六）D-二聚体检测
参见《临床检验基础》
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