采集脑脊液一般用腰椎穿刺术（腰穿）获得，必要时用小脑延髓池穿刺术（池穿）或侧脑室穿刺术获得。
（一）腰椎穿刺的适应证
1．原因不明的剧烈头痛、昏迷、抽搐、瘫痪时要做腰穿。
2．怀疑脑炎或脑膜炎时，必须做腰穿抽取脑脊液检查。
3．怀疑颅内出血、蛛网膜下腔出血，不能做CT检查时，有必要做腰穿。
4．怀疑有脑占位性病变、脑膜白血病时必须做腰穿。
5． 评价炎性神经病和多发性神经根病时须做腰穿抽取脑脊液检查。
6．有脑膜刺激症状，包括外伤、炎症等时须做腰穿。
7．神经系统疾病需要系统观察或需要椎管内给药和腰麻等都须做腰穿。
（二）腰椎穿刺的禁忌证
1．各种原因所致的颅内高压、眼底检查有视盘（视乳头）水肿时，一定要先做CT和MRI检查。
2．穿刺部位有化脓感染或腰椎结核者。
3．凝血酶原时间过长、血小板低于50×109/L、做腰穿或任何原因有出血倾向者，应在凝血障碍纠正后方可做穿刺。
4．脊髓有压迫症状时做腰穿应谨慎，因腰穿可使脊髓压迫症状加重。
5．开放性颅脑损伤或有脑脊液漏出者。
6．全身状况不允许行穿刺时。
（三）腰椎穿刺的并发症
1．腰穿后头痛 腰穿后头痛是常见的一种腰穿并发症，是由于腰穿放出脑脊液使颅内血管扩张、充血或静脉被牵拉而引起 的；或由于脑脊液放出过多而造成颅内压减低，使三叉神经感觉支配脑膜大血管组织牵拉、移位引起头痛。
2．腰背痛、神经根痛 因穿刺造成局部软组织损伤所致，当穿刺不当时，可使韧带失去正常张力而产生腰背部的酸痛。
3．脑疝 由于腰穿时脑脊液释放过多，使颅腔与椎管之间的幕上分腔与幕下分腔之间的压力增大，导致脑疝形成，出现头痛、颈痛、精神萎靡、瞳孔不等大、意识障碍加重等症状，应立即采取脱水、降颅压等措施。
4．出血 一般出现腰穿所致创伤性出血时，大多数是刺破蛛网膜或硬膜下静脉，出血少时，很少引起临床症状；只有刺破大血管（如马尾根血管）时，才出现大出血。
5．感染 因消毒不严或无菌操作不严引起的，常见脊椎骨髓炎、椎间盘感染、硬膜外脓肿和细菌性脑膜炎等。
（四）腰穿引起的损伤出血与蛛网膜出血的鉴别
1．腰穿损伤出血 ①腰穿不顺利，损伤局部血管；②外伤出血不多，血液与脑脊液混合不均匀，抽取的脑脊液先混有血液后逐渐清亮，前后标本不一致；③出血过多，静止后，血液自行凝固；④标本静置，红细胞下沉，上液澄清；⑤显微镜观察，红细胞呈盘状；⑥腰脊液压力多正常。
2．蛛网膜下腔出血 ①腰穿顺利，无损伤；②血液与脑脊液混合均匀，前后标本相同；③标本放置后均不凝固；④离心后，上清呈淡黄色，潜血试验阳性；⑤显微镜观察红细胞为陈旧红细胞（红细胞破碎、边缘不整）；⑥腰穿时脑脊液压力常增高。
3．腰穿损伤出血与蛛网膜下腔出血的鉴别诊断
（1）三管试验：先用3个试管分别接取脑脊液进行比较，若从第1管至第3管颜色逐渐变淡，红细胞计数逐渐减少，提示人工损伤出血，如三管颜色一致，红细胞计数相同，提示因蛛网膜下腔出血所致。
（2）离心试验：红细胞下沉，上清无色、透明，则大多为腰穿损伤所致；若离心后上清液呈橘红色或黄色，提示蛛网膜下腔出血。
（3）潜血试验：腰穿损伤性出血时，由于细胞未溶解，上清液无游离血红蛋白，故潜血试验阴性。而蛛网膜下腔出血2 h后，由于有游离血红蛋白，潜血试验呈阳性反应。
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