第一节 病毒感染的检查方法
科学的进步促进了病毒感染诊断技术的发展，传统的检查方法已逐渐被一些简便、快速、敏感、特异的检查方法所替代，这为病毒性疾病的早期诊断、治疗及预防提供了可靠的科学依据。
一、标本的采集、运送与保存
病毒感染标本的采集、运送与保存等各个环节处理是否得当，将直接影响检测结果，故临床应予以高度重视。
（一）标本的采集
采集标本应在疾病的早期或急性期进行，因此时体内的病毒在大量增殖，检出率较高。根据临床诊断和感染部位不同可分别采集不同的标本。如呼吸道感染可采集鼻咽洗漱液或痰液；肠道感染则采集粪便标本；脑内感染应取脑脊液；若为病毒血症，则可抽取血液标本；如需做血清学检查时，应采取双份血清标本，即在发病初期和病后2～3周时各取1份血清标本进行检测，然后对照两份血清标本中的抗体效价，若抗体效价随病程的发展有明显升高，超出病初抗体效价4倍以上时才具有诊断意义。
应该注意的是，采集标本时一定要注意严格无菌操作，以防发生感染或污染。
（二）标本的运送与保存
因病毒在常温下很容易失活，故采集的标本应立即送验。如不能及时送验或运送路途较远时，应注意低温保存，可将标本置于装有冰块的冰壶中运送。若标本被细菌污染，可根据细菌的种类在标本中选择性的加入适量青霉素、链霉素或庆大霉素等抗生素以杀灭污染菌。此外，大多数病毒对甘油有较强的抵抗力，故可将病变组织、粪便等标本置于含抗生素的50%甘油盐水缓冲液中，低温保存送检。
总之，在病毒感染标本的采集、运送与保存过程中，应做到“早、冷、速”，即尽早采集、低温保存、迅速送验，以提高检出率。
二、病毒的形态学检查
（一）光学显微镜检查
由于病毒体积极小，在光学显微镜下只能观察到体积较大的痘类病毒或病毒感染后所致的细胞病变，如受染细胞中的包涵体及多核巨细胞病变等。
（二）电子显微镜检查
1．电镜直接检查法 使用电子显微镜可直接观察到病变标本中的病毒颗粒，有助于疾病的早期诊断。如从病人血清、粪便、疱疹液等标本中可直接检查有无乙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、轮状病毒及疱疹病毒等。
2．免疫电镜检查法 在病毒形态学检查中，免疫电镜检查法更加特异且准确率高。检查方法是在制好的病毒标本悬液中加入相应抗体混合，标本中的病毒颗粒即凝聚成团，再用电镜观察。如可从粪便标本中检查甲型肝炎病毒和轮状病毒等，可提高病毒标本的检出率，优于电镜直接检查法。
三、病毒的分离培养
病毒具有严格的活细胞内寄生性，故分离培养病毒必须具有易感的活细胞。实验室常用的方法主要有细胞培养、鸡胚培养和动物接种等。
（一）细胞培养
组织细胞培养又称单层细胞培养，是目前分离培养病毒最常用、最主要的方法。本法是将处理后的病毒标本接种于单层活细胞内，经过一定时间培养后，在光学显微镜下就可直接观察到病毒感染细胞后所引起的各种细胞病变，如细胞发生圆缩、集聚、坏死、脱落；细胞内形成包涵体及多核巨细胞病变等，是判断病毒是否增殖的重要指标。常用的细胞来源有人胚肾细胞、人胎盘羊膜细胞、猴肾细胞等。细胞培养多用于病毒的分离培养、检测中和抗体及制备疫苗等。
（二）鸡胚培养
鸡胚培养是一种既经济又简便的病毒培养方法。通常选用孵化9～12d龄的鸡胚，根据病毒的种类不同将病毒标本接种于鸡胚的不同部位。常用接种部位有尿囊腔、卵黄囊、羊膜腔、脑内等。如流感病毒的初次分离常接种于羊膜腔，而传代培养则接种在尿囊腔内；狂犬病病毒的分离培养常采用脑内接种。
（三）动物接种
动物接种是比较原始的病毒分离培养方法。常用实验动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、鸡、猴等。接种部位有脑内、皮内、皮下、腹腔及静脉等。常根据病毒的种类选择易感动物和适当接种部位，如乙型脑炎病毒可采用小白鼠脑内接种；柯萨奇病毒常接种于乳鼠的腹腔内等。接种后，应认真观察和记录动物的发病情况，以协助临床诊断疾病。实验动物虽是长期以来用于病毒分离培养、制备病毒抗原及病毒疫苗的理想实验工具，但由于实验动物本身常带有病毒，可干扰实验结果，特别是制备病毒疫苗时存在严重的潜在危险，故现已逐渐被细胞培养所代替，但乳鼠仍是某些病毒（如柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等）的理想实验工具。
四、其他检查方法
1．免疫学检查法 免疫标记技术已广泛应用于临床诊断病毒性疾病，常用的方法有免疫酶标法、免疫荧光法、放射免疫法、免疫印迹法、胶体金法等。目前应用最广的是酶联免疫吸附试验和胶体金法。由于这些方法操作简单易于掌握，结果出现较快，敏感性和特异性均较强，是目前较为理想的快速诊断法。
2．核酸检测法 常用的检测法有两种。①病毒核酸杂交技术：此法是利用核酸探针技术来检测标本中有无病毒核酸的方法。本法比酶标法更加特异、快速、敏感，且可定量和分型。②聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种快速体外核酸扩增技术。当标本中核酸含量甚微不易检出时，可利用该技术使待测DNA迅速扩增。由于该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点，临床已用于多种标本的检测。
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