染色质的标本制作与观察

实验五　X染色质的标本制作与观察

一、实验目的

（1）掌握鉴定人类X染色质的方法。

（2）了解X染色体失活的有关理论假说以及失活染色体上的基因所控制的遗传性状的特点。

二、实验用品

显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、漱口杯（灭菌）、吸水纸、离心机、吸管、固定液（甲醇与冰醋酸的体积比为3∶1）、2．0g/L甲苯胺蓝染色液、生理盐水等。

三、实验内容

（1）取材：先漱口三次，将口腔内杂物漱出，然后用牙签的钝面刮取口腔颊部黏膜细胞，将其放入盛有3mL生理盐水的离心管中，轻轻摇动使细胞分散于生理盐水中。

（2）离心收集细胞：以800～1000r/min进行离心10min。

（3）固定：离心结束后，轻轻将上清液除去。留下的沉淀物用固定液固定10min。

（4）离心：1000r/min，离心10min。

（5）制备细胞悬液：去掉上清液，根据细胞沉淀的多少适量加入几滴新配制的固定液，用吸管吹打成细胞悬液。

（6）滴片：用吸管将细胞悬液滴在载玻片上，在空气中干燥。

（7）酸解：当载玻片上的固定液全部挥发以后，在载玻片上滴加5mL盐酸，处理10 min，然后用清水漂洗几遍。

（8）染色：在20．0g/L甲苯胺蓝染色液中染色30min。染色结束后，用清水漂洗以去掉浮色，在空气中自然干燥。

（9）镜检：在油镜下依次观察细胞核着色均匀、核膜完整的细胞80～100个，计数具有靠近核膜边缘的半月形X小体的细胞数。

【实验提示】

（1）首先在低倍显微镜下检出细胞分散且染色均匀的视野，然后转用高倍镜和油镜进行仔细观察。

（2）并非在所有的正常女性细胞中都能看到X染色质，用正常女性的组织切片，统计200～400个没有破损、形态正常的细胞，可观察到具X染色质的细胞比率为30%～50%。

（3）良好的标本应该具备以下条件：核质呈网状或细颗粒状分布，核膜清晰，染色适度，细胞周围无杂菌。X染色质在镜下观察呈一浓染小体，其轮廓清楚，大小为1μm左右，常附在核膜边缘或靠近内侧。形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形等。若X染色质部在核膜的边缘，就不容易与其他染色质块相区别。一般以在核膜内缘检测到为阳性。

（4）取口腔黏膜时，严防口腔中细菌的污染。

四、实验报告

描绘所观察到的X染色质的形态特征和在细胞中的分布情况。

宋陈玲