细菌培养特征的观察

实验七　细菌培养特征的观察

一、目的要求

1．掌握观察菌落的方法、细菌在液体和半固体培养基的生长表现及意义。

2．了解细菌L型菌落特点。

二、实验原理

培养特征是指微生物群体在培养基上的形态和生长情况，在细菌分类鉴定工作上可作为一方面依据。细菌培养特征的检验，主要包括平板培养上的菌落特征、斜面培养上的菌苔特征、液体培养时生长特征、半固体培养时的运动特征、液体培养特征等。

个体微生物在固体培养基上生长繁殖而形成的肉眼可见的群落称为菌落。菌落形态特征包括菌落的大小、形状（圆形、假根状、不规则状等）、边缘（如整齐、波状、裂页状圆锯齿状、有缘毛等）、透明度（如不透明、半透明等）、隆起情况（如扩展、台状、低凸、凸面、乳头状等）、表面光泽（如闪光、不闪光、金属光泽等）、湿润度、色素、溶血情况等。总的来说，细菌在一定培养基上的菌落特征是比较稳定的，但受培养条件，尤其是培养基的成分影响较大，有时培养温度、培养时间的长短，也影响菌落应有的特征，观察时应予注意。一般情况下，较密集的菌落较小，较分散的菌落较大，长在薄培养基上的菌落较小，而长在厚培养基的菌落较大。观察时，应选择分布疏密适中的单个菌落作为对象。

斜面菌苔特征的观察，要划直线接种，经培养3～5d后观察，记载其生长程度（如良好、微弱、不生长等）、菌苔形状、菌苔隆起情况、表面性状、表面光泽、透明程度、颜色等。

细菌在液体培养基中生长一般出现3种情况：均匀浑浊生长、沉淀生长、表面生长（液体培养基表面形成菌膜）。观察时记录混浊程度、是否结絮或产生沉淀，以及有无气泡、气味及培养液有无颜色等。

细菌在半固体培养基中生长时，应注意观察穿刺线路是否清晰及周围培养基的浑浊程度。若穿刺线路清晰、细菌沿着穿刺线路生长、培养基透明度无明显变化，表示细菌不会运动；若穿刺线路模糊或呈根须状、培养基变浑浊，表示细菌会运动。

细菌在抗生素、溶菌酶、胆盐等作用下，细胞壁的肽聚糖结构受到破坏或合成被抑制，而成为细胞壁缺陷型细菌。革兰阳性菌细胞壁主要成分是肽聚糖，一般多采用青霉素、新型青霉素Ⅱ及先锋霉素等作诱导剂。菌落为典型“油煎蛋”样，有3种：L型：菌落中心致密、较厚、透光度差，由细颗粒组成。周边较宽、由透明颗粒组成，呈花边状。G型：无上述核心，菌落全由透明粗颗粒组成。F型：同L型菌落，有核心，但周边为透明丝状。

三、实验内容及方法

1．材料。

菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌（无毒株）、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌L型。

培养基：营养琼脂平板和斜面、半固体琼脂、肉膏汤、血琼脂、L型培养基。

2．方法。

（1）将金黄色葡萄球菌、炭疽芽胞杆菌（无毒株）分别用分区划线法接种于营养琼脂平板和血液琼脂平板，将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌分别接种营养琼脂斜面。

（2）将枯草芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌（无毒株）和金黄色葡萄球菌分别接种于肉膏汤。

（3）将肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别用穿刺法接种于半固体琼脂。

（4）将金黄色葡萄球菌L型接种于L型培养基。

（5）37℃培养箱中培养18～24h。

（6）观察细菌的生长现象。

3．结果记录及分析。

固体培养基：观察菌落和菌苔特征。观察特征时应注意菌落形状、大小、边缘、透明度、湿润度、溶血现象和色素等，这些特点因菌种和所用培养基不同而异。尤其要观察金黄色葡萄球菌的溶血作用和脂溶性色素，铜绿假单胞菌的水溶性色素、炭疽芽胞杆菌的卷发状菌落。

液体培养基：液体基中细菌生长有3种现象即均匀混浊、沉淀和表面生长（菌膜形成）。观察时，应注意观察液体培养基透明度，管底是否有沉淀，表面是否有菌膜。

半固体培养基：观察细菌在半固体培养基中生长时，应注意观察穿刺线路是否清晰及培养基的混浊程度。若穿刺线路清晰，细菌沿穿刺线生长，培养基透明度无变化，表示细菌无动力，即无鞭毛；若穿刺线路模糊或呈根须状，培养基变混浊，表示细菌有动力，即有鞭毛。

L型平板：观察L型菌落。亦可染色后观察（Diene染色法）。

四、思考与讨论

菌落形态是细胞表面状况、排列方式、代谢产物、好气性和运动性的反映，一般每种菌在一定条件下的菌落特征是一定的。但环境条件的改变也会引起菌落性状的改变，如培养条件、培养基成分、培养时间等因素的影响，因此，在不同条件下，菌落特征所出现的微小差异不能误认为菌株发生了变异，观察时务必注意。菌落形态大小也受邻近菌落影响。菌落靠得太近，由于营养物有限，有害代谢物的分泌与积累，生长受到抑制。因此，以划线法分离菌种时，相互靠近的菌落较小，分散的菌落较大。