肠杆菌科细菌的选择培养和血清学分型鉴定

实验二　肠杆菌科细菌的选择培养和血清学分型鉴定

一、目的要求

1．掌握肠杆菌科细菌的选择培养。

2．掌握肠道致病菌与非致病菌的鉴别。

3．掌握血清学分型鉴定方法。

二、实验原理

1．肠杆菌科细菌的选择培养。

肠杆菌科细菌包括一大群生物性状相似的革兰阴性无芽胞杆菌，其中部分为致病菌，如沙门菌属、志贺菌属等；而多数为肠道正常菌群，在一定条件下可以致病。一般致病菌不发酵乳糖，条件致病菌中除变形杆菌外均可发酵。

肠道标本一般需接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离，分离纯菌后，根据菌落特点，结合革兰染色及氧化酶反应结果做进一步鉴定。肠道标本分离一般选用一个强选择培养基和一个弱选择培养基，强选择培养基有SS（Salmonella Shigella Agar）、HE（Hektoen Enteric Agar）、XLD（Xylose Lysine Desoxycholate Medium）等，弱选择培养基有麦康凯琼脂（Mac Conkey Agar，Mac）、中国蓝琼脂、伊红亚甲基蓝琼脂（Eosin Methylene Blue，EMB）等。一般接种一个强选择性培养基（如SS琼脂）、一个弱选择性培养基（如麦康凯），37℃培养箱中培养。如表2－1所示。

表2－1　常见肠道培养基的选择原理

2．肠杆菌科细菌的鉴定。

（1）初步鉴定。原则是：①确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化—发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别；②肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应3个类群；③选择生化反应进行属种鉴别。

（2）最后鉴定。肠杆菌科各属细菌的最后鉴定是根据生化反应的结果定属、种，或再用诊断血清做凝集反应才能做出最后判断。

三、实验内容及方法

1．肠杆菌科细菌常见细菌的选择培养。

（1）材料。

菌株：大肠埃希菌、痢疾杆菌、伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌。

培养基：SS平板、HE平板、Mac平板、中国蓝平板、EMB平板、营养琼脂6种培养基。

（2）方法。

4个人一组化培养基，取6种培养基各5块。

挑取少量菌，用分区划线接种法，将5种菌分别接种在SS平板、HE平板、Mac平板、中国蓝平板、EMB平板、营养琼脂平板上，37℃培养箱中培养18～24h，观察记录各菌在各个培养基上的生长情况，并加以比较。

（3）结果记录及分析。

观察各菌在各个培养基上的生长情况，记录培养基颜色的变化、菌落形态。整理成表格形式。对各培养基的选择效果加以评价如表2－2所示。

表2－2　肠杆菌科细菌常见的选择培养结果

2．肠杆菌科细菌的血清学分型鉴定。

（1）材料。

菌株：经初步鉴定的志贺菌沙门菌；

诊断血清：志贺菌多价及单价血清、沙门菌多价及单价血清。

（2）方法。

玻片的一端加生理盐水1滴，另一端加诊断血清1滴；取少量待测菌，分别与生理盐水、诊断血清混合均匀；若待检菌与诊断血清混合后数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝聚物，而生理盐水对照呈均匀混浊，则为凝集阳性；在5～10min内不出现凝集者为阴性。

（3）结果记录及分析。

记录实验过程及结果，分析待测菌是否为志贺菌沙门菌。

经鉴定不符合血清学诊断标准的，报告“待测菌非志贺菌沙门菌”；形态、培养、生化反应、血清凝集试验结果阳性，可初步报告“分离到的待测菌为××志贺菌××沙门菌”。

四、思考与讨论

1．肠杆菌科细菌有哪些共同的生物学特性？

2．如何区分肠杆菌科细菌和其他革兰阴性杆菌？

3．志贺菌属细菌分为哪几种群？