尿液标本的细菌学检验

实验二　尿液标本的细菌学检验

一、尿液标本中常见的病原体

无泌尿系统感染的正常人尿液应该是无菌的，故尿液中查有细菌则为异常。引起泌尿系统感染的常见病原菌有大肠埃希菌、链球菌、肠球菌、葡萄球菌、淋病奈瑟菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、伤寒沙门菌、沙眼衣原体、解脲脲原体和生殖道支原体等。

但是，由于外生殖道、尿道口常常有许多细菌定居，易造成标本采集时的污染，因此，需要通过定量尿培养以区分共生菌和潜在致病菌。

二、尿液标本一般细菌检验程序

尿液标本一般细菌检验程序如图3－2所示。

图3－2　尿液标本一般细菌检验程序

三、注意事项

1．尿液的菌落计数。

（1）直接计数法。

将尿液标本混匀，取1滴尿液于载玻片上，覆盖盖玻片，用相差显微镜观察每个视野的细菌数，可大致估计尿液中的细菌数。如每视野有100个以上的细菌则尿液中的细菌数约为≥10⁷菌数/mL，每视野有10个以上的细菌则尿液中的细菌数约为≥10⁵菌数/mL，每视野有1个以上的细菌则尿液中的细菌数约为≥10⁴菌数/mL：可同时观察细菌的形态和运动情况。也可将0．001mL尿液涂布在玻片上进行革兰染色，用油镜观察，如每视野有1个以上的细菌则尿液中的细菌数约为≥10⁵菌数/mL。

（2）定量接种法。

用定量接种环取尿液，在血平板上连续划线接种；或用无菌移液器吸取0．1mL尿液标本用9．9mL无菌生理盐水稀释后，取0．1mL于血平板上涂布接种，35℃孵箱中孵育18～24h，计数平板上生长的菌落数。再计算每毫升尿液中细菌数。

每毫升尿液中细菌数＝平板上的菌落数×1/接种环含尿量（mL）

（3）倾注培养法。

取0．1mL尿液标本用9．9mL无菌生理盐水稀释后，取1mL于无菌平皿中，加入已溶化并冷却至50℃的普通琼脂培养基，立即混匀，凝固后35℃孵箱中孵育18～24h，计数平板上生长的菌落数。乘上100，即得每毫升尿液中的细菌数。

若革兰阴性杆菌尿液菌落计数＜10⁴/mL可判断为污染，＞10⁵/mL可判断为感染，10⁴/mL～10⁵/mL为可疑需重复检查。对于革兰阳性球菌而言尿液菌落计数＞10⁴/mL可判断为感染菌。菌落计数的影响因素较多，与抗生素的使用、输液、使用利尿剂、尿液的pH变化和细菌种类有关，需要根据具体情况进行分析评估。

2．尿路感染一般由单一细菌引起，偶尔也可由1种以上细菌引起。当同一份标本中同时检出3种或3种以上细菌时，应认为采集或处理标本时被杂菌污染，需重新留取尿液标本检查。

3．尿液采集时间应选择在抗生素应用前，通常为晨起第一次尿液。采集方法有清洁中段尿采集法、膀胱穿刺采集法、导尿法和集尿法。采集容器应清洁、无菌、加盖、防渗漏，且不含防腐剂和抑菌剂。

4．尿液是细菌的良好生长环境，采取后应立即检验，放置时间过长会导致感染菌和杂菌过度生长，影响诊断的准确性。不能及时接种的标本可临时存放4℃冰箱，但不得超过2h。冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌的培养。

四、病例分析

1．患者，男，33岁，因尿痛、尿频，尿道有黄绿色脓性排出物和分泌物而入院。脓性分泌物涂片革兰染色镜镜检显示有大量多形核白细胞，并且其内有革兰染色阴性双球菌。

（1）根据上述结果，该患者感染的病原体首先考虑是什么？

（2）根据该菌的特点写出详细的检验程序。

2．患者，男，56岁，有尿路不适症状，主要表现为平卧位时有尿意，而站立位时不适症状明显减轻，并有浮肿、尿少，尿常规检查脓细胞满视野。取尿培养，过夜后，在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徙生长现象。若在培养基中加入0．1%石碳酸或0．4%硼酸可以抑制其扩散生长，形成一般的单个菌落。在血琼脂平板上有溶血现象。

（1）根据上述结果，该患者感染的病原体首先考虑是什么？

（2）根据该菌的特点写出详细的检验程序。

3．患者，女，27岁，受凉后出现膀胱尿道刺激症状，头痛，恶寒，发热37．4℃，周身关节酸痛，小便黄，无血尿及乳糜尿。对其尿进行培养，在血平板上为光泽、湿润、光滑、呈灰色的菌落。该菌在含有伊红美蓝培养基中，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

（1）根据上述结果，该患者感染的病原体首先考虑是什么？

（2）根据该菌的特点写出详细的检验程序。