家兔肝性脑病

第一节　家兔肝性脑病

实验目的

（1）用家兔肝大部结扎方法，复制急性肝功能不全模型，并以十二指肠插管灌注复方氯化铵溶液，观察血氨升高在肝性脑病发病机制中的作用。

（2）了解谷氨酸钠是针对氨中毒的一种基本治疗用药，探讨其治疗的病理生理基础。

实验原理

肝性脑病是继发于严重肝脏疾病和（或）门体侧支循环形成的疾病所引起的神经精神综合征。本实验采用家兔肝大部结扎术造成肝解毒功能急剧降低，在此基础上经十二指肠注入复方氯化铵溶液，致使家兔血氨迅速升高，并出现震颤、抽搐、昏迷等类似肝性脑病症状，同时记录出现相应症状时所用的氯化铵剂量和时间。通过与对照组家兔比较，证明氨在肝性脑病发生机制中的重要作用及肝脏在解氨毒当中的重要地位。

实验对象及相关用品

1.实验对象

家兔。

2.实验相关用品

兔台，兔手术器械，粗棉线，细导尿管，纱布，缝合线，滴定架（配上下固定夹），100mL输液瓶，5mL、10mL注射器及针头，婴儿秤，1%普鲁卡因溶液，2.5%复方氯化铵溶液（NH4Cl 25g、NaHCO₃15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），2.5%复方氯化钠溶液（NaCl 25g、NaHCO₃15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），2.5%复方谷氨酸钠溶液（谷氨酸钠25g、NaHCO₃15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），生理盐水。

实验分组

实验组、对照组和治疗组。

观测指标

呼吸（频率、幅度），角膜反射，瞳孔大小，对刺激的反应，以上指标体现氨的中毒强弱；出现肌肉痉挛、抽搐及强直的时间，出现相应症状时所需复方氯化铵用量，通过比较以上指标反映氨在肝性脑病发生中的作用。

实验步骤

1.实验组

甲兔（肝叶大部结扎＋肠腔注入复方氯化铵溶液）。

（1）取健康成年家兔一只，称重后仰卧位固定于兔实验台上，颈前部及上腹部剪毛，在上腹部正中用1%普鲁卡因局部浸润麻醉。

（2）肝叶的游离和结扎：自胸骨剑突下正中切口，长6～8cm，打开腹腔，即可见位于右季肋区肝脏的边缘。术者左手食指和中指在镰状韧带两侧将肝脏往下压，右手持剪刀剪断肝与膈肌之间的镰状韧带。然后下压、下拉肝脏，再将肝叶翻向上方，用手剥离肝胃韧带，辨明肝脏各叶后（图14-1），用蘸过生理盐水的粗棉线结扎肝左外叶、左中叶、右中叶及方形叶的根部，使上述肝叶迅速变成暗褐色。由于供应右外叶及尾状叶的门脉血管为独立分支，不会同时被结扎。

（3）十二指肠插管术：沿胃幽门向下找出十二指肠，用小圆缝合针作荷包缝合（图14-2），然后用眼科剪在荷包中央剪一小口，将细导尿管插入肠腔约4cm，收缩荷包结扎固定，将肠管回纳腹腔，检查腹腔内无出血后，关闭腹腔。

图14-1　肝脏各叶

图14-2　十二指肠荷包缝合

（4）观察家兔一般情况、角膜反射及对疼痛刺激反应等。

（5）每隔5min向十二指肠插管中注入复方氯化铵溶液5mL，仔细观察动物情况（如有无反应性增强、肌肉痉挛、抽搐等），直至出现全身性抽搐、角弓反张。记录所用复方氯化铵溶液总量，并计算每公斤体重用量。

（6）继续推注复方氯化铵溶液直至家兔死亡，记录存活时间和复方氯化铵溶液剂量。

2.对照组

（1）乙兔（肝叶假手术＋肠腔注入复方氯化铵溶液）：乙兔称重后，除肝叶不结扎外，其余操作步骤同甲兔。如前所述每隔5min向肠腔注入复方氯化铵溶液，当推注的氯化铵量（按mL/mg计算）达到甲兔出现大抽搐的量时，观察家兔情况并记录；继续推注氯化铵，直至全身性抽搐发作为止，并记录所用复方氯化铵溶液总量及每公斤体重用量。

（2）丙兔（肝叶大部结扎＋肠腔注入复方氯化钠溶液）：再取一家兔称重后，手术操作同甲兔，术后每隔5min向肠腔注入复方氯化钠溶液5mL，观察家兔有无异常，待推注量达甲、乙兔出现抽搐的氯化铵量时，分别观察家兔情况并记录。

3.治疗组

丁兔（肝叶大部结扎＋肠腔注入复方氯化铵溶液＋推注复方谷氨酸钠溶液）：步骤同实验组（甲兔），肠道内灌注复方氯化铵后待动物出现抽搐症状时，立即自耳缘静脉缓慢注入复方谷氨酸钠溶液20mL/kg，观察并记录治疗后症状有无缓解。

注意事项

（1）游离肝脏时，动作宜轻柔，以免肝脏破裂出血。结扎线应扎于肝叶根部，避免拦腰勒破肝脏。

（2）复方氯化铵溶液切勿漏入腹腔。各组推注液体速度、重复推注时间应一致。

（3）手术完毕，肠腔注射氯化铵观察结果时，应将兔撤离兔台，以免出现全身性抽搐时观察不到。

（4）动物性别一致，体重相差不超过250g。

实验报告要点

（1）各组根据实验组别不同书写相应的实验原理和实验步骤。

（2）家兔症状、用药量记录详细清楚。

思考题

1.氯化铵中毒引起肝性脑病的机制如何？谷氨酸钠为何能缓解肝性脑病症状？

2.对4只家兔的结果进行比较，各说明什么问题？

3.实验中引起血氨变化的原因是什么？临床上肝功能障碍的患者血氨升高的主要原因和机制是什么？