家兔实验性肝细胞性黄疸

第三节　家兔实验性肝细胞性黄疸

实验目的

（1）学习肝功能和胆色素代谢的常用生化指标测定。

（2）观察肝细胞性黄疸动物的一般状况及血、尿改变，掌握此型黄疸胆色素代谢障碍的特点。

实验原理

CCl₄引起肝细胞损伤，受损的肝细胞处理胆红素的能力减弱，导致正常代谢所产生的非结合胆红素不能全部转化为结合胆红素，引起血中非结合胆红素增加。而未受损的肝细胞，仍能将非结合胆红素转化为结合胆红素而输入毛细胆管；但这些结合胆红素可经坏死的肝细胞流入血液中，或因肝细胞肿胀、汇管区渗出性病变与水肿，以及胆管内胆栓，使胆汁排泄通路受阻，而致较多结合胆红素反流入血液循环中。其特点是血中非结合和结合胆红素均增高；尿中胆红素阳性，尿胆原常增加。

实验对象及相关用品

1.实验对象

家兔。

2.实验相关用品

注射器，小试管，滴管，吸管，移液器，手术器械一套，烧杯，兔台。

CCl₄，生理盐水，20%乌拉坦，碘酊（碘酒），胆红素标准储存液，胆红素标准应用液，重氮试剂，空白试剂，无水乙醇，无水甲醇，氯仿，0.962mol/L BaCl₂溶液，浓盐酸，0.0725 mol/L亚硝酸钠溶液。

胆红素标准储存液：称取胆红素10mg，加氯仿溶解并稀释至100mL，储棕色瓶中，冰箱保存。

胆红素标准应用液：临用前取标准储存液10mL，用无水乙醇稀释至100mL。

重氮试剂：甲液，对氨基苯磺酸0.2g，浓盐酸3mL，加蒸馏水至200mL，冰箱保存；乙液，亚硝酸钠0.25g，加蒸馏水50mL，冰箱保存，临用前取甲液10mL，乙液0.3mL混合使用。

空白试剂：15mL浓盐酸，用蒸馏水稀释至1000mL。

0.0725mol/L亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠0.5g，溶于100mL 0.1mol/L NaOH溶液中，棕色瓶保存。

实验分组

实验组与对照组。

观测指标

（1）肉眼观察：动物处死后，观察比较实验兔与对照兔的皮下脂肪颜色和肝脏外观、形态。

（2）生化指标观察：血清总胆红素；血清1min胆红素；尿胆红素定性；尿胆原定性。

实验步骤

1.模型复制

家兔两只，一只为对照组，另一只为实验组，分别称重。实验家兔用CCl₄灌胃，剂量为3mL/kg；对照家兔为生理盐水灌胃。

2.观察与采血、尿

实验组家兔及对照组家兔在模型复制后48h左右进行观察及采血、尿。

动物用20%乌拉坦5mL/mg耳缘静脉注射麻醉，手术分离颈动脉，插管取血1mL，置清洁干燥试管中。2000r/min离心5min，分离血清于另一试管中。下腹部做正中切口3～5cm，找到膀胱，注射器穿刺取尿约6mL。

3.血清胆红素定量测定

（1）胆红素校正曲线制备：取试管6支按下表操作。

立即混匀，室温静置30min，540nm波长比色，以空白管调零，读取各管吸光度，算出回归直线或绘制校正曲线。

（2）血清1min胆红素和总胆红素测定：取试管4支，分别标明1min胆红素空白管、测定管和总胆红素空白管、测定管。按下表操作。

立即混匀，1min胆红素需准确记录1min。总胆红素室温静置30min，540nm波长比色，分别以各自空白管调零，读取测定管吸光度，代入回归直线或查找校正曲线即得，胆红素含量（μmol/L）＝17.10×（mg/mL）。

4.尿胆红素定性实验

（1）方法一：取尿液1mL左右，沿管壁缓慢加入碘酊0.5mL，若交界出现绿色环，则证明尿中有胆红素存在。

（2）方法二：取尿液1mL左右置于小试管中，加浓盐酸1滴，混匀后加0.5%亚硝酸钠溶液（0.0725mol/L）1滴，摇匀立即观察颜色。深绿色为胆红素强阳性，绿色为阳性，淡绿色为弱阳性，尿液黄色消退为可疑，尿色不变为阴性。

5.尿胆原定性实验

取尿液2mL于小试管中，加0.962mol/L BaCl₂4～5滴，3000r/min离心3min沉淀，以除去胆红素。吸取上清尿液1mL，用蒸馏水稀释成1∶10，然后取5mL稀释成1∶20，并依次稀释成1∶40、1∶80、1∶160共3管。取各稀释的尿液5mL加入醛试剂0.5mL，于室温下静置10min后，自管口向底部察看，观察时试管底部垫一白纸。尿液呈樱桃红色即为尿胆原阳性，以最高阳性稀释倍数报告结果。

注意事项

（1）家兔必须健康、成熟、体重适宜，否则易死亡。

（2）采血时试管一定要清洁干燥，以免溶血。溶血标本不能用作胆红素定量测定。

（3）做胆红素定量测定时，若血胆红素含量过高，超出校正曲线范围，可将血清先用生理盐水稀释再行测定，结果乘上稀释倍数。

实验报告要点

结合实验过程，总结归纳肝细胞性黄疸的特点。

思考题

1.肝细胞性黄疸胆色素的代谢特点有哪些？

2.结合实验结果，试述肝细胞性黄疸的发病机制。

（中国人民武装警察部队医学院　孙慧燕）