【摘要】：姬姆萨染料是由天青、伊红Y组成的染料。在一定的pH下，染料中有色离子作用于细胞，细胞根据其嗜色特性，选择性地吸附所需染料而着色。将精液涂片放在染色架上，滴加瑞氏染液5滴，加pH7.0磷酸盐缓冲液10滴，混匀，再加姬姆萨染液2滴，轻轻摇动2分钟，染色20分钟。做精液细胞学分类，计数片中100个细胞，如细胞较少，可计数50个或20个细胞进行分类。如做“多重精子缺陷指数”计算，计数200个精子。
三、精液涂片的染色（改良瑞-姬氏混合染色）
1. 原理 瑞氏染料是由酸性染料伊红Y和碱性染料美蓝组成的复合染料。姬姆萨染料是由天青、伊红Y组成的染料。在一定的pH下，染料中有色离子作用于细胞，细胞根据其嗜色特性，选择性地吸附所需染料而着色。
2. 试剂
（1）瑞氏染液：瑞氏染料1g，加入500ml甲醇溶液中，倒置混匀后，放置37℃培养箱内，每天倒置混匀2次，一周即可使用。
（2）姬姆萨染液：姬姆萨染料0.5g，置于33ml甘油中，60℃水浴2h，使其溶解，再加60℃预热的甲醇33ml混合后置棕色瓶内，室温下放置数日后方能使用。
（3）pH7.0磷酸盐缓冲液：0.1moL/LKH2PO4 30mL+0.1moL/Na2HPO4 70Ml，混匀。
3. 染色方法
（1）将精液涂片放在染色架上，滴加瑞氏染液5滴，加pH7.0磷酸盐缓冲液10滴，混匀，再加姬姆萨染液2滴，轻轻摇动2分钟，染色20分钟。
注：根据作者经验，将染液提前混合后再进行染色不能达到此种染色的满意效果。
（2）自来水缓慢冲洗1分钟，然后放入95%酒精中1秒钟，脱掉浮色，再放入自来水缓慢冲洗1分钟，如果染色较淡，可不用酒精脱色。
（3）于小电风扇下吹干，加中性树胶，用24×50mm盖玻片封片，置油镜下进行分类计数。做精液细胞学分类，计数片中100个细胞，如细胞较少，可计数50个或20个细胞进行分类。如做“多重精子缺陷指数”计算，计数200个精子。
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