皮肤真菌相差显微镜直接检查

五、皮肤真菌相差显微镜直接检查

皮肤真菌显微镜直接检查是形态学检查的基本方法，也是最简单、快速、实用的实验室诊断方法。阳性结果可确定真菌感染，但阴性结果不能排除诊断。

1. 方法 用接种刀在酒精灯火焰上消毒并冷却后，轻轻刮取皮屑于滴有一滴10%KOH的载物片上，混匀，加盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶。然后轻压盖玻片，将标本压薄，置于相差高倍镜或相差油镜下检查真菌孢子和菌丝。为了防止制好的玻片干燥，使KOH形成结晶，可向KOH溶液中加入甘油和二甲亚砜。取材时操作者要注意个人防护，戴一次性手套，要注意消毒，避免使患者之间交互感染。取材要注意采集皮损边缘的鳞屑，避免刮破皮肤。

本实验室多采用相差显微镜高倍镜或相差油镜检查真菌，较在光镜高倍镜下检查真菌更清晰，更易辨认。相差显微镜是利用光的衍射和干涉现象照射标本，形成明暗不同的反差，有助于增强透明与半透明的有形成分的轮廓。应用相差油镜（放大1000倍）进行观察，使观察的物体结构更加清晰，这与普通光学显微镜只能用高倍镜（放大400倍）进行观察，无论放大倍数、清晰度还是视觉效果都呈现出质的飞跃。

2. 检测标准　皮肤真菌显微镜直接检查不同于菌种鉴定。作者判断相差镜下真菌孢子的标准是：在相差高倍镜或相差油镜下观察并计数100个上皮细胞上是否附着有真菌孢子，如未见真菌孢子，为无真菌孢子或未检出真菌孢子；100个上皮细胞上检到10个以下上皮细胞附着有真菌孢子，为少量或偶见；在100个上皮细胞上检到10～60个上皮细胞上附着有真菌孢子，为中量；在100个上皮细胞上检到60个以上上皮细胞附着有真菌孢子，为大量。根据经验，作者认为正常皮肤可检到少量真菌孢子或称真菌样孢子，因此，在镜下未检出真菌菌丝和真菌孢子，或未检出真菌菌丝而只检出少量真菌孢子时，还不能确认为是真菌感染，只有在检出大量或中等量真菌孢子时才认为有真菌感染。

3. 实例　在相差显微镜下容易检出真菌的有发癣、花斑癣、糠秕孢子菌性毛囊炎、体癣和手足癣，甲癣需选则好采集标本的部位才能查到真菌。常在花斑癣的皮屑中检到大量真菌孢子和菌丝，在体癣中常检出真菌孢子，有时会检出菌丝，在糠秕孢子菌性毛囊炎的皮屑中常检出大量大小不等的真菌孢子，在10%KOH与皮屑的混悬液中也有大量真菌孢子。而念珠菌则在阴道分泌物和尿红细胞相差镜检中已做描述。

1）采集断发查真菌：采集断发放在载物片上，加10%KOH和盖玻片，可见在高倍镜或相差高倍镜下的断发残端内含有大量真菌孢子，见图3-100 527～529。

2）采集皮屑查真菌

（1）花斑癣是最易直接镜检出的真菌，相差油镜下可见成堆的圆形和卵圆形芽生孢子及短菌丝，直径3～8μm，短菌丝可呈香肠形、棍棒形，见图3-101 530～532。

（2）糠秕孢子菌毛囊炎是糠秕马拉色菌引起的毛囊感染，是较易检出的真菌，镜下可见大量成群的，大小不等的圆形厚壁孢子。见图3-102 533～535；

（3）头部、躯干、四肢和手、足癣较易检出厚壁圆形孢子，有时可检到菌丝，见图3-103 536～538，图3-104 539～541，图3-105 542～544和3-106 545～547。

图3-100　527～529 毛发真菌孢子 每一根断发上都包含着多个真菌孢子，527～528光镜高倍镜下拍照，529相差高倍镜下拍照，放大530倍

图3-101　530～532 花斑癣真菌孢子和菌丝　每一个皮屑细胞上都符着大量孢子和菌丝，在10% KOH混悬液中也可见到大量真菌菌丝和孢子，相差油镜下拍照，放大1327倍

图3-102　533～535 糠秕马拉色菌菌丝和孢子 533～534单个上皮细胞上符着数个真菌孢子，535在10%KOH混悬液中含有大量真菌孢子，本组图于相差高倍镜下拍照，放大530倍

图3-103　536～538 体癣真菌菌丝 皮屑细胞上符着大量真菌菌丝，536～537相差油镜下拍照，放大1327倍，可见菌丝内有小孢子生长；538相差高倍镜下拍照，放大530倍

图3-104　539～541 体癣真菌菌丝 皮屑细胞上生长着大量真菌菌丝和孢子，539皮屑细胞上生长的菌丝，540～541皮屑上皮细胞上生长的菌丝和孢子，539～540相差油镜下拍照，放大1327倍，541相差高倍镜下拍照，放大530倍

图3-105　542～544 体癣真菌孢子 相差油镜下拍照，放大1327倍，542～543单个皮屑细胞上的真菌孢子，通常大小不等，较圆，很多孢子呈椭圆形或稍不规则形

图3-106　545～547 体癣真菌孢子 相差高倍镜下拍照单个皮屑细胞上符着的圆形或椭圆形孢子，放大530倍