溶菌酶的溶菌作用

实验1　溶菌酶的溶菌作用

(The role of lysozyme bacteriolysis)

【目的】

证实体液中溶菌酶的存在及溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用。

【原理】

溶菌酶(lysozyme)是一种小分子蛋白质，属乙酰氨基多糖酶。它的等电点高(pH 11.0)，能与细菌牢固地结合，并裂解肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键，使细菌溶解死亡。溶菌酶的主要作用对象是革兰阳性菌。革兰氏阴性菌肽聚糖层少，又有外膜保护，故在一般情况下不受溶菌酶的影响。

溶菌酶广泛分布于机体的组织、体液与分泌液，其中泪液含量最高，为血清含量的100～150倍。临床慢性支气管炎、局部免疫功能降低，及唾液中溶菌酶低于正常，各种类型的白血病患者血清和尿中溶菌酶含量有所增加。

【材料】

1.唾液、泪液(或乳汁)、标准溶菌酶(1ng/ml)、生理盐水、2％～5％琼脂盐水。

2.细球菌(M.lysodeikticus)。

3.毛细吸管、打孔器(或滤纸片)、无菌平皿等。

【方法】

1.取一无菌平皿，倾入5ml细菌悬液，再倾入5ml已融化的2.5％琼脂盐水，迅速混匀，平放待凝。

2.用打孔器按图1-1所示打孔，挑去孔内琼脂，用毛细吸管分别加唾液、泪液(或乳汁)、标准的溶菌酶和生理盐水(或用无菌圆形滤纸片分别蘸取上述四种液体，按图1-1所示贴于平皿表面)。

3. 37℃培养过夜，观察结果。

图1-1　溶菌酶实验示意图

【结果】

孔周或滤纸片周围出现的透明圈即为溶菌环。注意比较溶菌环的大小。

【注意事项】

1.加样时，避免样品溢出孔外，孔内不应有气泡。

2.做定量检测时，先要用标准品制备标准曲线，然后根据环的直径及标准曲线求出样品含量。

3.标准曲线绘制后，每次检验样品时，最好在同一平皿上备有标准品对照，以资比较。

【思考题】

溶菌酶的溶菌作用有什么生物学意义?