中性粒细胞吞噬功能实验

实验2　中性粒细胞吞噬功能实验

(Neutrophil phagocytosis test)

【目的】

1.熟悉白细胞吞噬的原理和方法。

2.理解机体的非特异性免疫机制。

【原理】

机体内具有吞噬功能的细胞大致分为两大类，即小吞噬细胞和大吞噬细胞。小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞，大吞噬细胞则是存在于组织中的巨噬细胞和血液中的大单核细胞。它们构成机体的天然防御机能。本实验通过体外或动物体内的细胞吞噬试验，以证实机体的非特异性免疫机制。

【材料】

1.器材:显微镜、载玻片、厚凹玻片、接种环、采血针、滴管、湿盒、恒温培养箱、注射器、针头、打孔器、平皿、酒精灯、火柴。

2.材料、试剂: 3.8％枸橼酸钠、2％碘酒、75％酒精、瑞氏染液、蒸馏水、6％可溶性淀粉、1％鸡红细胞悬液、溶壁微球菌(100mg/ml)、1/15mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.4)、琼脂、标准溶菌酶(100μg/ml)、新鲜鸡蛋清(1∶10)、生理盐水、香柏油。

3.菌种:白色葡萄球菌24h斜面培养物。

4.动物:小白鼠。

【方法】

1.取厚凹玻片一片，在凹孔中用滴管加入一滴3.8％枸橼酸钠溶液。

2.依次用碘酒、酒精消毒手指或耳垂及采血针后，从消毒部位采取三大滴血加入凹孔中混匀。

3.将接种环烧灼灭菌后，刮取少许白色葡萄球菌置于凹孔血液中搅匀。

4.将上述凹玻片放入湿盒，于37℃温箱中作用45min，注意每15min混匀一次。

5.取出凹玻片，用烧灼灭菌的接种环将凹孔中血液搅匀后取血3～4环于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片。接种环烧灼灭菌后放回原处。

6.待血片自干后，用瑞氏染液染色。用吸管取瑞氏染液数滴滴于上述血片上先染色1min。然后加等量缓冲液，轻轻晃动混匀，继续染5min后水洗，用吸水纸吸干后镜检。

【结果】

油镜检查:先寻找白细胞，观察胞浆中有无吞噬的细菌。如结果正确，可见胞浆呈淡蓝色，细菌呈深蓝色，红细胞呈褐色，胞核呈紫红色。

观察100个嗜中性粒细胞，计数吞噬细菌的白细胞数与所吞噬的细菌总数，分别求出吞噬百分率和吞噬指数。

图2-1　中性粒细胞

【注意事项】

1.所用器材要洁净。

2.越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。

【思考题】

简述中性粒细胞吞噬实验的理论意义与实际意义。