巨噬细胞吞噬功能实验

实验4　巨噬细胞吞噬功能实验

(Macrophage phagocytic function test)

【目的】

检测巨噬细胞能否吞噬异物的试验，可通过巨噬细胞吞噬异物的数目来推测其免疫功能的强弱，是检测机体非特异性免疫功能的一种方法。

【原理】

巨噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。

小鼠腹腔内注射淀粉肉汤溶液，可刺激小鼠产生无菌性炎症，诱导巨噬细胞的聚集，活化。3～4天后向小鼠腹腔内注入鸡红细胞悬液，30min后解剖收集腹腔巨噬细胞，染色、镜检可观察其对鸡红细胞的吞噬现象，亦可见到巨噬细胞中的鸡红细胞所发生的形态改变。通过计算吞噬百分比或吞噬指数可测定巨噬细胞的吞噬功能。

【材料】

1.小白鼠。

2. 6％淀粉肉汤溶液。

3. 1％鸡红细胞悬液。

4.缓冲液: Hanks液。

5.染料:美蓝。

6.显微镜等。

【方法】

1. 3天前给小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤1ml，诱导无菌性炎症。

2.即日腹腔注射1％鸡RBC1ml，30min后注射2ml Hanks液，轻揉小鼠腹部。

3.颈椎脱臼法处死小鼠，解剖小鼠暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用镊子轻轻夹起腹膜，将腹膜剪一小口，用尖吸管尽可能多地冲洗出小鼠腹腔的吞噬细胞。

4.收集腹腔液，置一洁净试管内，加1～2滴1％碱性美蓝染色。

5.用尖吸管将腹腔液吹打均匀(尽量避免产生气泡)并视腹腔液内细胞浓度多少，于载玻片上推片或涂片，自然干燥或37℃温箱干燥。

6.油镜镜检。

【结果】

用油镜观察，分别计数100个巨噬细胞中吞噬鸡RBC的吞噬细胞数及100个吞噬细胞中吞噬的鸡RBC总数，并观察鸡红细胞的消化程度，按下列公式计算出吞噬百分比和吞噬指数，并判断巨噬细胞的消化程度:

鸡红细胞的被消化程度分为4级:

Ⅰ级:未消化，胞核浅红或浅黄带绿色，胞核浅紫红色。

Ⅱ级:轻度消化，胞核浅黄绿色，核固缩，成紫蓝色。

Ⅲ级:重度消化，胞核淡染，胞核呈浅灰黄色。

Ⅳ级:完全消化，巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小的空泡，边缘整齐，胞核隐约可见。

【注意事项】

1.充分揉搓腹腔，尽可能将吞噬细胞冲洗下来。

2.用尖吸管吸取腹腔液时，尽量避开腹腔脏器，避免损伤血管引起出血，影响实验结果。

【思考题】

1.哪些细胞具有吞噬作用?有何区别?

2.小鼠体内如何形成吞噬细胞?

3.观察到小鼠体内吞噬细胞如何用免疫学理论进行解释?