巨噬细胞移动抑制实验

实验5　巨噬细胞移动抑制实验

(Macrophage migration inhibition test)

【目的】

1.熟悉巨噬细胞或白细胞的移动抑制试验的原理、方法及意义。

2.通过本实验了解细胞免疫的特异性。

【原理】

根据白细胞可以游走的特点，将事先用布氏杆菌致敏的小鼠腹腔渗出细胞置毛细玻璃管中37℃培养，24h后白细胞可从管口向外移动扩散成扇状。若再次遇到相应的抗原时，由于致敏淋巴细胞能释放出巨噬细胞移动抑制因子(M IF)或中性粒细胞移动抑制因子(NIF)，抑制巨噬细胞、中性粒细胞的移动，故白细胞游出毛细管口面积减少。根据此情况计算的移动指数(M I)，可反映机体的细胞免疫水平。因此本实验是检测细胞免疫功能的方法。

【材料】

1.材料药品:布氏杆菌致敏的小鼠、布氏杆菌抗原、Hanks液、RPM I 1640培养液、凡士林、8％淀粉肉汤。

2.器具:水平离心机、解剖显微镜(或低倍显微透射仪)、恒温箱、毛细玻璃管(内径1mm，两端粗细一致，长7～8cm)、平底凹孔玻璃板(凹孔直径2cm)、盖玻片、注射器、砂轮、带盖瓷盘。

【方法】

一、动物细胞制备

布氏杆菌致敏的小鼠腹腔注射8％淀粉肉汤0.5m l，3～4天后将动物处死，向腹腔内注射2ml Hanks液，无菌取出腹腔渗出细胞。配成10％的细胞悬液(或用Hanks液洗涤2次后，配成8×10⁷个/ml的白细胞悬液)。

二、操作方法

1.用长针头注射器吸取10％的细胞悬液，装入预先封好一端的毛细玻璃管内(约3/4体积)，每份标本实验组和对照组各装4支，装入各管的细胞悬液应相等。

2.将毛细管置于离心管中，于水平离心机内，2000r/min离心5min后，用小砂轮沿毛细管的细胞-液面之间划痕，小心折断。

3.将含有细胞的毛细管端蘸少量凡士林，置平底凹玻片中固定，加入RPM I 1640细胞培养液，实验组培养液中加入相应的抗原，即2×10⁶/ml布氏杆菌，对照组加含细胞培养液，加盖玻片，将凹玻片水平置于带湿纱布的瓷盘中，37℃孵育24h后观察结果。

三、结果分析

取出凹玻片，用解剖显微镜或低倍显微透射仪测出各毛细管的巨噬细胞或白细胞移动的扇面长短直径，按以下公式计算出移动指数(M I)。

图5-1　白细胞移动抑制试验示意图

M I＜0.8为阳性，0.8＜M I＜1.2为正常值。

【注意事项】

1.在实验中，一批实验用的毛细管口径要相同。

2.实验中需严格按无菌操作方法进行，不能接触洗涤剂、消毒剂等，以免影响结果。

【思考题】

1.记录结果，计算出M I，并作解释。

2.白细胞移动抑制实验有何实际意义?