补体结合实验

实验19　补体结合实验

(Complement fixation reaction)

【目的】

了解补体结合反应的原理和方法。

【原理】

补体结合实验是根据抗原-抗体复合物能吸附(固定)并激活补体的特性，用一定量的补体和致敏红细胞来检查抗原、抗体间有无特异性结合的一类实验。该实验包括待检系统和指示系统，有5种成分参与反应，包括抗原、抗体、补体、羊红细胞和溶血素。待检系统与指示系统竞争补体系统，先加入待检系统，使其获得优先结合补体的机会。若待检系统中存在待测的抗体(或抗原)，则抗原与抗体形成免疫复合物后可结合补体;再加入指示系统时，因为已无游离的补体而不出现溶血，此为补体结合试验阳性。若待检系统中不存在待测的抗体(或抗原)，将会有游离补体参与指示系统的反应，最终出现溶血，此为补体结合试验阴性。本方法主要用于某些传染性疾病的诊断和流行病学调查。

【材料】

1.乙型脑炎病毒抗原。

2.乙型脑炎病人血清(56℃30min灭活，1∶50稀释)。

3.补体(豚鼠新鲜血清)。

4. 1％绵羊红细胞。

5.溶血素。

6.其他:生理盐水、试管、吸管。

【方法】

1.取试管5支，依次标明顺序。

表19-1　补体结合试验(单位: m l)

2.按表所示依次加入病人血清、抗原、补体、生理盐水并摇匀。

3.放37℃水浴箱中30min。

4.取出加入溶血素和羊红细胞，摇匀。

5.再放入37℃水浴箱中水浴30min，取出观察结果。

【结果】

试管内液体混浊呈浅红色为不溶血。

1.管内液体透明呈红色为溶血。

2.第2、3、4管为对照管均应发生溶血，第5管为羊红细胞对照不应溶血。凡第1管红细胞发生溶血者为补体结合反应阴性，而不溶血者为阳性。

【注意事项】

1.为防止产生抗补体，要求所有反应成分均不能被细菌污染，血标本应立即分离血清，及时操作或冰冻保存。

2.所有的试管、吸管等玻璃仪器必须十分洁净。

3.每次试验前各成分(除待测抗原或抗体)必须通过预备试验来确定各成分的使用量(滴定效价)，配制成规定的浓度使用，才能保证结果的可靠性。

【思考题】

补体系统在机体是如何发挥抗感染作用的?