实验37 酶免疫组化技术
(Enzyme-labeled immunohistochemical techniques)
【目的】
了解和掌握酶免疫组化技术的基本原理和方法。
【原理】
酶免疫组化技术就是用酶标记已知抗体或抗原，然后与组织标本在一定条件下反应，如果组织中有相应抗原或抗体，抗原和抗体相互结合成复合物，复合物上所带酶分子遇到底物时，能催化底物水解、氧化或还原，产生颜色反应，从而识别出标本上抗原或抗体的性质以及分布的位置，并可通过图像分析计算其相对含量。
【材料】
1.经过预处理(固化或脱蜡)的组织切片。
2.纯丙酮。
3. TBS缓冲液(pH7.6 0.05mol/L Tris-HCl): Tris 30.25g、NaCl 40.0g、HCl 11ml，加蒸馏水溶解至500ml，调pH值至7.4～7.6。抗体稀释用含1％牛血清白蛋白的TBS。
4. 3％H2O2甲醇液。
5.一抗、HRP标记的二抗。
6.底物溶液: OPD-H2O2。
7. Mayer苏木精复染液:苏木精0.1g、钾明矾5g、柠檬酸0.1g、水合氯醛5g、碘酸钠0.02g、蒸馏水100ml。将苏木精、钾明矾和碘酸钠溶于蒸馏水，再加温搅拌溶解，加柠檬酸和水合氯醛，混合后煮沸5min，冷却后过滤备用。
【方法】
1.取经过预处理的组织切片，纯丙酮固定5min，空气中干燥10min，TBS浸洗5min，吸干。
2.用3％H2O2、甲醇液灭活内源性过氧化物酶15min，TBS浸洗5min，吸干。
3.滴加50μl适当稀释的一抗，放湿盒内37℃温育1h，TBS浸洗5min，吸干。
4.滴加50μl适当稀释的HRP标记的二抗，放湿盒内37℃温育30min，TBS浸洗5min，吸干。
5.滴加50μl底物显色液，放湿盒内37℃温育30min，TBS浸洗5min，擦片。
6.加Mayer苏木精复染核1min，用自来水冲洗，空气中干燥。
【结果】
高倍镜下观察:以细胞膜上或胞浆着棕黄色为阳性细胞，无色者为阴性细胞，并计算阳性细胞百分率。
【注意事项】
被检测组织中，应去除与标记酶相同的内源性酶或类似物质。
【思考题】
酶免疫组化技术有何实际意义?
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
