实验室报告病例的同源性分析

三、实验室报告病例的同源性分析

实验室报告病例的同源性分析是在公共卫生实验室开展食源性病原体基因分型鉴定的基础上，通过对不同公共卫生实验室及不同送检样品的病原菌DNA区带数量与质量的分析比对，从而确定其亲缘关系，及时发现和预警一定地区范围内发生的食源性疾病暴发事件。病原菌DNA同源性分析为及时察觉和发现病例分布较为广泛的跨区或跨国食源性疾病暴发事件提供了十分有效的技术手段。下面以一起发生在多个国家的国际性食源性疾病暴发事件的预警及调查处理为例，介绍病原菌DNA同源性分析方法在食源性疾病暴发预警中的应用。

1．暴发疫情的察觉与预警

1994年12月1日至1995年1月31日，英格兰与威尔士地区感染沙门菌agona（S．agona）血清型的人数呈突然增加之势。在此期间，英国公共卫生实验服务处（PHLS）的肠道病实验室共收到各地送来的41株S．agona血清型菌株。而在此前的12个月中，仅收到9株同一血清型菌株。据分析，大多数菌株是从居住在伦敦市的10岁以下的犹太儿童分离到的，部分病人住在英格兰的其他城市。对S．agona血清型菌株采用噬菌体分型技术作进一步鉴定，均为S．agona噬菌体型PT15。暴发事件经流行病学调查，发现与从以色列进口到英国的一种快餐食品（kosher savory snack）有关，从剩余的污染食品和有污染食品进食史的病人均分离到S．agona噬菌体型PT15菌株。

2．国际监测网的启动

在英国发现和报告该起暴发事件以后，供应该污染快餐食品的有关国家（包括以色列、美国和加拿大等）的公共卫生机构接到警报，被告知S．agona血清型感染病例有可能增多。欧盟各国也通过WHO设立的沙门菌国际监测网（Salm-Net）接到类似通报。该起事件通报以后，以色列、美国、法国和加拿大的公共卫生实验室先后报告从本国部分病人和食品样品中分离到S．agona菌株，经噬菌体分型鉴定为PT15。

3．S．agona PT15菌株的同源性分析

为了分析不同国家分离到的S．agona PT15菌株的同源性，PHLS对从英国、以色列、美国、加拿大和法国分离到的78株S．agona PT15菌株采用PFGE方法进行基因分型鉴定。菌株DNA经XbaⅠ消化，其片段采用PFGE分析，结果出现11种各不相同的具有14到17条可解析染色体片段（25～680 kbp之间）的PFP谱型和1种变异谱型（图7-2）。将这些谱型分别以S．agona PFP（XbaⅠ）1～9和S．agona PFPs（XbaⅠ）11、S．agona PFPs（XbaⅠ）12标示，变异谱型以S．agona PFP（XbaⅠ）6a标示。S．agona PFP（XbaⅠ）10为与噬菌体分型菌株无关的S．agona血清型菌株，作为PFGE分析时的对照菌株。

占优势的PFGE谱型为S．agona PFP（XbaⅠ）6（图7-2的2号条带），该种谱型至少形成15条可解析的DNA片段（25 kbp到485 kbp之间），78株分离菌株中有51株显示为该种谱型。PFP6的变异谱型是从加拿大的食品样品中分离得到的。PFP6a与PFP6的不同之处是在395 kbp处多了一条DNA片段，其他与S．agona PFP6很难区别。

图7-2　S．agona PT15菌株PFGE谱型分析

各国S．agona PT15菌株的PFP（XbaⅠ）谱型分布如表7-9。英国46名病人分离的S．agona PT15菌株，经鉴定有26株菌株（占56．5％）为PFP6。这26株菌株是在1994年11月25日到1995年2月17日进食快餐食品后发病的病人中分离到的。从2份污染食品分离到的S．agona PT15菌株经鉴定也为PFP6。其他20株S．agona PT15菌株，经鉴定为9种不同于暴发菌株所具有的PFGE谱型（PFP6）特征，因此可以排除为该起暴发事件的相关病例。

从以色列的9名病人和2份污染食品中分离到的S．agona PT15菌株也采用PFGE方法进行分析，结果均为PFP6。从美国与暴发事件有关的10名病人分离到的菌株也为PFP6。从加拿大3份污染食品中分离到的菌株中，有2株菌株为PFP6，另1株菌株为PFP6a，与PFP6谱型十分近似。从法国6名病人分离到的S．agona PT15菌株出现3种PFPs谱型，没有一株菌株为PFP6。

表7-9　不同国家S．agona PT15菌株的PFP（XbaⅠ）谱型分布

4．结论

对英国、以色列、美国、加拿大和法国分离到的78株S．agona PT15菌株进行了PFGE分析，结果出现11种PFGE谱型。结果显示，具有PFP6特征的PFGE谱型与进食以色列加工制作的快餐食品的病人呈高度相关。从而证明发生在1994年至1995年英国、以色列和美国的暴发事件与具有某种PFGE图谱特征的S．agona PT15菌株有关。在该起暴发事件发生前11个月中，英国所分离到的S．agona PT15菌株和在法国部分病人中分离到的S．agona PT15菌株与引起该起暴发事件的PFP6型菌株无关。

（蔡剑　陈直平　金培刚）

参考文献

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