三、其他凝集技术
(一)抗球蛋白技术
1.原理 抗球蛋白参与的血凝技术由Coombs于1945年建立,故又称为Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法。所谓不完全抗体,多半是7S的IgG类抗体,能与相应的抗原牢固结合,但在一般条件下不出现可见反应。Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体,连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体,使红细胞凝集。
2.技术类型与应用 根据试验原理不同分为直接Coombs试验和间接Coombs试验,其基本原理如图6-6。
图6-6 抗球蛋白试验原理示意
(1)直接Coombs试验 为直接检测红细胞表面有无不完全抗体的试验。患者体内抗红细胞抗原的不完全抗体与红细胞表面抗原结合形成致敏红细胞,但不完全抗体不能使致敏红细胞互相连接而凝集。当加入抗球蛋白血清(完全抗体)时,便与红细胞表面的不完全抗体结合,在致敏红细胞之间搭桥,出现凝集现象。本试验可用玻片法做定性测定,也可用试管做半定量分析,主要用于新生儿溶血症、输血反应、自身免疫溶血性贫血等疾病的检测。
(2)间接Coombs试验 即用已知的不完全抗体检测受检红细胞上相应的抗原,或用已知红细胞抗原检测待测血清中相应的不完全抗体。将受检血清与具有相应抗原的红细胞反应,若受检血清中含有相应的不完全抗体,红细胞被致敏,再加入抗球蛋白血清就可出现可见的红细胞凝集。Coombs试验还可采用专一特异性的抗球蛋白血清,如抗IgG、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等,用来分析结合于红细胞上不完全抗体的类别。
本试验是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法,也是Rh血型物质检出的确证试验。凡酶法或其他方法检测红细胞为Rh-时,必须用本法证实,以排除弱阳性。本试验操作繁琐,受条件影响大,如温度、时间、离子强度、离心速度等均会影响试验结果。间接Coombs试验多用于检测母体抗-Rh抗体,以便及早发现和避免新生儿溶血的发生。此外也可用于检测输血、血制品、器官移植所致的免疫性血型抗体以及交叉配血。
(二)协同凝集技术
金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白能与人及多种哺乳动物(猪、兔、羊、鼠等)血清中的IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SPA结合后,两个Fab段暴露在葡萄球菌表面,仍保持其抗体活性和特异性,当其与特异性抗原相遇时,可出现凝集现象。在此凝集反应中,金黄色葡萄球菌菌体为IgG抗体的载体。
思考题
1.归纳常用凝集技术的类型及其应用。
2.根据试管凝集的结果,一份免疫血清的效价是1∶320,另一份是1∶1 280,哪一份血清中的抗体含量高?请分析血清效价的高低与待测抗体含量的关系。
(张其霞)
免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。