抗原抗体反应形成沉淀物最佳条件

二、免疫电泳技术

（一）免疫电泳

1.原理　免疫电泳（immunoelectrophoresis，IEP）是将区带电泳与双向免疫扩散相结合的一种免疫化学分析技术。其基本原理是将蛋白质抗原在琼脂糖凝胶中进行电泳，样品中不同的抗原成分因所带电荷、相对分子质量及构型不同，电泳迁移率各异，而被分离成肉眼不可见的若干区带。停止电泳后，在与电泳方向平行的琼脂槽内加入相应抗体进行双向免疫扩散。分离成区带的各种抗原成分与相应抗体在琼脂中扩散后相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的沉淀线。根据沉淀线的数量、位置和形状，与已知的标准（或正常）抗原、抗体形成的沉淀线比较，即可对样品中所含成分的种类及其性质进行分析、鉴定。

2.临床应用　免疫电泳为定性试验，目前主要应用于纯化抗原和抗体成分的分析以及正常和异常体液蛋白的识别、鉴定等。

（二）火箭免疫电泳

1.原理　火箭免疫电泳（rocket immnoelectrophoresis，RIE）是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。其基本原理是电泳时琼脂凝胶中的抗体不发生移动，而样品孔中的抗原在电场的作用下向正极移动，并与琼脂中的抗体发生反应，在二者比例合适时，即形成一个状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰。峰的高度与样品中的抗原浓度呈正相关。用已知量的标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据样品的沉淀峰高度即可计算出待测抗原的含量。反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待检抗体的含量。

2.临床应用　火箭电泳只能测定μg/mL以上的抗原含量，如低于此水平则难以形成可见的沉淀峰。加入少量125 I标记的标准抗原共同电泳，可在含抗体的琼脂中形成放射自显影结果。

（三）对流免疫电泳

1.原理　对流免疫电泳（counter inmunoelectrophoresis，CIEP）是双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极移动，而抗体IgG相对分子质量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的移动速度较慢，电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的移动，带动抗体向负极移动，这样就使抗原和抗体定向对流并发生结合，出现肉眼可见的沉淀线。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，使其定向移动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短了试验时间。

2.临床应用　对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10～15倍。该方法用于可溶性抗原、抗体等分子性物质的检测与研究。