抗核抗体的测定

一、抗核抗体的测定

抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。细胞核内抗原成分包括核蛋白、核糖核蛋白（RNP）、DNA等。在某些因素如细菌、病毒、药物等的作用下，细胞核某些成分的性质发生改变，激发机体免疫系统产生多种ANA。ANA无器官和种属特异性，可与所有动物的细胞核发生反应。ANA主要存在于血清中，也可存在于胸腔积液、关节滑膜液和尿液等体液中，迄今已相继发现二十余种抗核内不同成分的ANA。

大多数自身免疫病ANA的检测呈阳性，如SLE、RA、混合性结缔组织病（MCTD）、干燥综合征（SS）、进行性系统性硬皮病（PSS）、慢性活动性肝炎等。但健康老年人也可有低效价，因此ANA阳性并不表示一定患有自身免疫病。

（一）抗核抗体的类型和临床意义

根据细胞核内靶抗原的分布及理化特性将ANA分为四大类，即抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体和抗核仁抗体，每一大类又因不同的抗原特性再分为不同亚类（图12-1）。

图12-1　抗核抗体谱的分类及组成

1.抗-DNA抗体　可以分为抗天然DNA抗体和抗变性DNA抗体两类。抗天然DNA抗体即抗双链DNA（dsDNA）抗体，抗变性DNA抗体又称为抗单链DNA（ssDNA）抗体。抗dsDNA抗体对SLE有较高的特异性，阳性率可达85％，美国风湿病学会已将其列为SLE诊断标准之一。抗-dsDNA抗体效价的高低也与疾病的活动性正相关，活动期增高，缓解期降低，对疾病活动期的判定和疗效观察很有帮助。但抗-dsDNA抗体的敏感性较低，仅为30～50％，因此抗-dsDNA抗体阴性不能排除SLE。抗-ssDNA抗体可见于SLE、其他结缔组织病和少数非结缔组织病患者，特异性较差。

2.抗组蛋白抗体　组蛋白由H1、H2A、H2B、H3和H4亚单位组成，5种组蛋白都有各自对应的自身抗体，统称为抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody，AHA）。它与抗DNA的自身免疫反应间具有一定的连锁性，抗-DNA抗体阳性患者的体内常同时能检出AHA，但AHA阳性并不一定伴有抗-DNA抗体阳性。抗组蛋白抗体主要出现于患有盐酸普鲁卡因、卡马西平等药物诱导性狼疮的患者体内，当患者血清中仅检出抗组蛋白抗体而无其他抗核抗体时，强烈支持药物性狼疮的诊断。SLE患者还可检出抗-dsDNA抗体和抗-ENA抗体，可作为鉴别诊断的依据。

3.抗-ENA抗体　ENA是一组可溶性核内多肽抗原，故名可提取性核抗原（extractable nuclear antigen，ENA），属非组蛋白，为酸性核蛋白抗原，由许多小分子RNA与多肽组成，多从动物的胸腺中提取。近年来的研究表明，ENA相应的抗体有十几种，主要种类有：

（1）抗-RNP抗体RNP即核糖核蛋白。抗-RNP抗体多见于混合性结缔组织病。高效价的抗-RNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义，而低效价的抗-RNP抗体可在SLE患者中出现。

（2）抗-Sm抗体抗　-Sm抗体是SLE的特异性标志之一，但阳性率偏低，约为30％～4％，可能是SIE的一种回忆性抗体，故在非活动期亦可检出。若将抗-dsDNA和抗-Sm抗体同时检测，可提高SLE的诊断率。

（3）抗-SS-A抗体　SS-A为SS的A抗原。抗-SS-A抗体主要见于SS，但也可见于其他自身免疫病如SLE。

（4）抗-SS-B抗体　SS-B为SS的B抗原，13％的SLE及30％的SS患者体内检出抗-SS-B抗体。

（5）抗-Scl-70　Scl-70抗原是DNA拓扑异构酶Ⅰ的降解产物，抗-Scl-70抗体几乎仅见于PSS，阳性率为40～60％，是PSS的标志性抗体，其他自身免疫病检查很少阳性。

（6）抗-Jo-1抗体　Jo-1是组氨酰tRNA合成酶，只位于细胞质。抗-Jo-1抗体是多发性肌炎（PM）和皮肌炎（DM）的标志性抗体，阳性率为25～40％。

4.抗-DNP抗体　亦称抗核蛋白抗体。核蛋白抗原由DNA和蛋白质组成，有不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。抗不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白吸收，它是形成狼疮细胞的因子，SLE活动期阳性率达80～90％，非活动期阳性率约为20％，其他结缔组织病较少见。可溶性DNP抗原存在于各种关节炎患者的滑膜液中，其相应抗体也可出现于RA病人的滑膜液中。

5.抗核小体抗体　核小体是染色质的最基本结构单位，由DNA和组蛋白构成。细胞凋亡而致核小体大量蓄积，诱导抗核小体抗体（AnuA）产生。AnuA是SLE又一特异性的标志抗体，对SLE敏感性为60％～80％，尤其对抗-dsDNA抗体、抗-Sm抗体阴性的SLE患者有较高诊断价值。

（二）抗核抗体的检测技术

目前检测ANA常用的检测技术有间接免疫荧光技术、ELISA、免疫印迹技术和放射免疫测定技术等。

1.间接免疫荧光技术　间接免疫荧光技术作为总ANA的筛选试验，是检测ANA的最有效方法和金标准。以核质丰富的组织培养细胞Hep-2细胞或灵长类动物肝脏冷冻切片作为抗原。将抗原固定于载玻片上，与受检血清中ANA形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物，再加荧光标记的抗人IgG（或抗人IgA，抗人IgM）抗体，形成核抗原-抗核抗体-荧光素标记的抗人Ig复合物，洗涤后在荧光显微镜下观察荧光着染强度和荧光图形。根据荧光图形可将ANA阳性的荧光现象分为5种主要的荧光核型，核型的确定对临床诊断具有参考价值（表12-3）。

表12-3　ANA荧光图形、核型与相关疾病

2.ELISA　临床常应用间接ELISA检测抗-dsDNA抗体、AHA、AnuA，其重复性好、敏感性高，并已有试剂盒供应。