碳源和氮源利用试验

三、碳源和氮源利用试验

(一)枸橼酸盐利用试验

1．原理　　某些细菌能利用铵盐作为唯一氮源并利用枸橼酸盐作为唯一碳源，分解枸橼酸盐生成的碳酸盐以及分解铵盐生成的氨等代谢产物使培养基变碱性，指示剂变色。

2．方法　将待检菌接种于枸橼酸盐培养基中，35℃孵育1～4 d。枸橼酸盐培养基(含溴麝香草酚蓝指示剂)由淡绿色变为深蓝色者为阳性(彩图8)。

3．应用　主要用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。

(二)丙二酸盐利用试验

1．原理　　在丙二酸盐培养基中，细菌能利用的碳源只有丙二酸盐。当某种细菌能利用丙二酸盐时，可将其分解为碳酸钠，使培养基变碱性，指示剂变色。

2．方法　将待检菌接种在丙二酸盐培养基上，35℃孵育1～2 d，观察结果。培养基由绿色变为蓝色者为阳性，培养基为绿色或黄色(仅葡萄糖发酵产酸)为阴性。注意某些利用丙二酸盐的细菌产碱量少，造成判断困难，可将其与未接种的培养基进行对比。阴性结果必须在培养48 h后方可报告。

3．应用　主要用于肠杆菌科属间及种的鉴别。

(三)葡萄糖酸盐试验

1．原理　　能将葡萄糖酸盐作为唯一碳源的细菌，可分解葡萄糖酸盐生成具有还原性的α－酮基葡萄糖酸。与班氏试剂作用在热碱性溶液中将二价的氢氧化铜还原为棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

2．方法　取待检菌大量接种于葡萄糖酸盐培养基，35℃培养24～48 h，加班氏试剂1 mL，充分混匀，隔水加热煮沸10 min，观察结果。出现黄到砖红色沉淀为阳性，不变或仍为蓝色为阴性(彩图9)。

3．应用　主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌的初步分群。

(四)乙酰胺利用试验

1．原理　　许多非发酵菌产生脱酰胺酶，可使乙酰胺经脱酰胺作用释放氨，使培养基变碱性。

2．方法　将被检细菌按种于乙酰胺培养基(含酚红指示剂)中，置35℃孵育24～48 h，观察结果。培养基由黄色变为红色为阳性，不变色为阴性。

3．应用　主要用于非发酵菌的鉴定。铜绿假单胞菌、去硝化产碱杆菌、食酸假单胞菌为阳性，其他非发酵菌大多数为阴性。

(五)马尿酸钠水解试验

1．原理　　某些细菌具有马尿酸水解酶，可使马尿酸水解为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。

2．方法　将待检菌按种于马尿酸钠培养基中，置35℃孵育48 h，离心沉淀，取上清液0．8 mL，加入三氯化铁试剂0．2 mL，立即混匀，10～15 min后观察结果。出现恒定沉淀物者为阳性。

3．应用　主要用于B群链球菌和嗜肺军团菌的鉴定。