实验动物的接种技术

二、实验动物的接种技术

(一)动物的接种途径和方法　

1．皮内接种法　常以家兔、豚鼠背部或腹部皮肤为注射部位，应选择动物的白毛处(以背部皮肤为宜)去毛消毒后，将皮肤绷紧，用1 mL的注射器附以最小号针头(4号针头)，平刺入皮肤，慢慢注入接种物，注射时感到皮肤有阻力且注射完毕后皮肤上应出现小圆丘形隆起，否则表示未注射至皮内。注射量一般为0．1～0．2 mL。

2．皮下接种法注　射部位多选择皮下组织疏松、便于接种、易于吸收的部位，一般选择背部。局部去毛消毒后，用左手拇指和食指将局部皮肤提起，使其形成一个三角形小窝，右手持注射器将针头从三角窝下部刺入皮下，感到针头可随意拨动即表示插入皮下，将接种物缓缓注入，此时可见在注射处皮肤有片状的隆起，拔出针头时以酒精棉球按住针孔片刻，防止注射物溢出。家兔或豚鼠的注射量为0．5～1 mL，成年小鼠为0．2～0．5 mL。

3．肌内接种法　注射部位以臀部肌肉或腿部肌肉为宜。将实验动物局部去毛消毒后，将接种物缓缓注入肌内。注射量视动物之大小而定，一般为0．2～l．0 mL。

4．静脉接种法

(1)家兔:注射部位以耳缘静脉为宜，若作多次注射，应先从耳尖部开始，以免因注射造成血管栓塞，致使下次注射不能再利用该血管。注射时，先将家兔用固定器或由另一个人固定，轻弹兔耳，并以酒精涂擦，使静脉血管扩张，用左手拇指与中指夹住耳部，并以食指垫子注射血管的下面，以小号针头刺入血管，注入接种物。在注入时，可见血管颜色变白，还可看到接种物沿血管进行。如果局部发现有片状隆起，注射物不易注入时，即表示针头未进入血管，应重新注射。注射毕，针头拔出时，应先以酒精棉球按住刺入处，再拔出针头，并应继续按住刺入处，并将兔耳竖起片刻，以免溢血。接种量一般为0．1～1．0 mL。

(2)小鼠或大鼠:注射部位为尾静脉。注射器应用　短颈的结核菌素注射器。注射前，先将小白鼠尾巴以75%的酒精棉球擦拭、消毒，使静脉扩张。实验者持注射器从尾静脉尖端开始顺血管方向刺入，若针头在静脉内，注入接种物时，则出现一条白线。若接种物不易注入，则另行注射。注入量一般不超过1．5 mL。

5．腹腔接种法小鼠的腹腔接种时，左手固定动物使小白鼠腹部朝上，头呈低位，右手持注射器向头端方向以45°刺入腹腔，此时有抵抗力消失的感觉，在针头保持不动的情况下推入接种物(图5－1，图5－2)。接种量一般为0．2～1．0 mL。

图5－1　小鼠抓取示意

图5－2　小鼠腹腔注射示意

6．脚掌接种法　先将实验动物脚掌的皮肤以碘酒和酒精消毒，然后将接种材料以小号针头注入脚掌的皮下。一般接种量为0．1～0．5 mL。

7．脑内接种法　脑内注射常用小鼠，在外耳道至眼上角连线l/2处，刺入颅内，缓慢注入，注射量为0．1～0．2 mL。

(二)接种后的观察与解剖

1．接种后观察　根据实验目的和要求，一般每日或每周观察1～2次，注意动物的生理体征，精神状态、接种部位及附近淋巴结的变化。必要时测量体温、体重及血液学指标，并详细记录。

2．动物解剖　动物死亡后，应立即解剖，若已发病或处于濒死状态，或观察期已满，则应人工处死进行解剖。若不能及时解剖，应将动物尸体包好，置低温冰箱中暂时保存。解剖实验动物，应在专用的实验台上进行。若解剖毒力强、传染性强或抵抗力强的病原微生物感染而死亡的实验动物，必须在专用实验室内进行操作。解剖方法　通常按下述步骤进行。

(1)固定动物:将动物尸体仰面固定于解剖台上或盘上，小白鼠可用大头针固定在解剖台上，较大的家兔和豚鼠可用钢针固定于解剖台上。

(2)剪开皮肤:检查接种部位有无炎症、脓肿等表现。然后用无菌镊子和剪刀，将动物自耻骨至颈部的皮肤作纵行剪开，再用刀背使皮肤与皮下组织剥离。检查皮下组织和腋下、腹股沟淋巴结有无病变。必要时，作涂片及培养检查。

(3)打开腹腔:自耻骨至横膈剪开腹肌(注意避免损伤肠管、膀胱等腹部脏器)，检查腹腔内有无渗出液，以及肝、脾、肾等脏器有无病变，必要时作涂片及培养检查。

(4)打开胸腔:撕开胸膛，用剪刀将胸部两侧肋骨作一个“^”形剪开，掀开胸骨，检查胸腔内有无渗出液及心、肺有无病变。取心血、心肺组织进行涂片及培养。

(5)打开颅腔:必要时将头部皮毛消毒后，沿头部正中线切开皮肤，开颅检查脑组织病变。

(6)解剖后处理:解剖后的动物尸体，应用　厚纸包好焚毁或高压消毒后掩埋。解剖器材用后应严格灭菌处理。

(三)常见细菌性疾病动物接种的鉴别诊断

利用动物实验进行细菌性疾病的研究和鉴别诊断具有重要的临床意义，是进行细菌性疾病的鉴别诊断不可缺少的一个组成部分(表5－1)。

表5－1　常见细菌性疾病动物接种的鉴别诊断表

续表5－1