流感嗜血杆菌培养结果

三、微生物学检查

1．标本采集　根据感染部位不同采集标本，如鼻咽拭子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥，及时送检。

2．检验方法

(1)直接镜检:痰液、脓液、鼻咽分泌物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉淀物涂片，革兰染色镜检。如见革兰阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症状，可作出初步诊断。

(2)分离培养:将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼脂和血琼脂培养基，其他标本可直接接种于巧克力色琼脂和血琼脂培养基，经35℃培养18～24 h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫星试验、X和V因子需求试验定种，再经过生化试验和荚膜肿胀试验分型。

(3)鉴定:本菌为革兰阴性短小杆菌，呈球杆状，丝状等多形态性;在巧克力色琼脂平板上为灰白色，中等大小的菌落，在兔血琼脂平板上形成不溶血、细小露滴状菌落;流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性，M－H琼脂平板卫星试验阴性;以X、V和X+ V因子纸片贴于接种细菌的M－H琼脂平板上，经35℃培养18～24 h后，仅在X+ V因子周围生长为流感嗜血杆菌。

(4)血清学试验:①直接荧光抗体法:首先将标本或培养物直接涂片，固定后用标记荧光素的流感嗜血杆菌抗血清染色，30 min后，洗去多余血清，用荧光显微镜观察。此法用时短，常用于早期诊断。②荚膜肿胀试验:取一定浓度菌悬液，滴于载玻片上，再依次滴加a～f流感嗜血杆菌抗血清混匀，加少量亚甲蓝液混和后覆盖玻片，室温10 min后，用油镜观察，如查见菌体呈蓝色，周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈则为阳性。此法可直接检查标本中的细菌，可用于早期诊断。③沉淀试验:用流感嗜血杆菌抗血清与脑脊液上清液或细菌培养物的上清液作环状沉淀实验。此试验可作菌型鉴定。此外，还有SPA协同凝集试验，反向胶乳凝集试验等血清学试验方法　。