厌氧菌感染的微生物学检验

四、厌氧菌感染的微生物学检验

(一)标本采集和送检

疑为厌氧菌感染标本采集的原则是无菌操作和避免接触空气。来自无正常菌群分布部位的标本(血液、心包液、关节液、胸腹腔积液、深部脓肿等)应以无菌操作的方法　抽取;齿龈拭子、痰液、粪便、流出的脓液、阴道分泌物、洗胃液等标本，因含有大量的正常菌群，不宜作厌氧菌培养。

标本采集后应立即送检。运送厌氧菌感染标本的方法　有针筒运送法(注射器运送法)、无氧小瓶运送法、标本充盈运送法(大量标本运送法)、组织块运送法和厌氧袋运送法。标本运送至实验室后，应在30 min内处理完毕，最迟不超过2 h。不能及时接种的标本，应置于室温保存，低温冷藏对细菌有害。

(二)肉眼观察及镜检

接种前均应仔细观察标本的性状，包括气味，是否为脓性、带血，有无硫磺样颗粒，有无黑色坏死组织或黑色分泌物等。这些性状有助于培养基的选择和厌氧菌的鉴定。除血液外，标本在接种前均应进行涂片染色镜检，观察细菌的形态、染色性，估计标本中大致的含菌量。镜检发现染色不均、形态奇特者，应疑为厌氧菌。

(三)分离培养

1．厌氧培养基①强化血琼脂平板:是最常用的非选择性培养基，几乎能培养出所有的厌氧菌。②卡那万古冻溶血琼脂平板:可抑制大多数兼性厌氧菌，使产黑素普雷沃菌早期产生黑色素。③胆汁七叶苷平板:用于选择性培养脆弱类杆菌。④卵黄平板和兔血平板:用于选择性培养产气荚膜梭菌。此外，还有FS培养基(梭杆菌选择培养基)、CCFA培养基(艰难梭菌选择培养基)、VS培养基(韦荣球菌选择培养基)等。

2．厌氧培养方法　和厌氧菌的确定常用的厌氧培养方法　有厌氧罐法、气袋法和厌氧培养箱法。前两种方法　简便，不需特殊设备，适用于小型实验室;后一种方法　设备较为昂贵，但培养效果好。

大多数厌氧菌初代培养生长缓慢，故厌氧培养于37℃下至少应培养48 h。若48 h培养无细菌生长，但直接镜检阳性，应继续培养5～7 d。

当初代培养有细菌生长时，为确定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。即从每个平板上挑取4～5个不同性状的菌落，每个菌落分别接种2～3个平板(每个平板分为4～6区，可同时做4～6个菌落的次代培养)。然后分别放有氧、无氧和含5%～10% CO₂环境培养48 h。若需氧和厌氧培养均生长，为兼性厌氧菌;如在需氧和厌氧培养生长不好，在含5%～10% CO₂环境生长良好，为微需氧菌;只在厌氧环境中生长的细菌即为专性厌氧菌。

3．鉴定试验厌氧菌可依据菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性作出初步鉴定，依靠生化反应及终末代谢产物等项检查做最后鉴定。