脑脊液标本的细菌检验

七、脑脊液标本的细菌检验

(一)标本采集与送检

脑脊液通常由临床医生通过腰椎穿刺术获得，采集量脑脊液3～5 mL，盛于无菌试管或小瓶中。收集到的脑脊液标本注意保温并应立即送检，15 min内送到实验室。不可置于冰箱保存，低温会使一些细菌死亡(如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和嗜血杆菌)，影响细菌的检出率。

(二)细菌学检验

1．检验流程　脑脊液标本细菌学检验流程见图18－8。

图18－8　脑脊液标本细菌学检验流程

2．涂片镜检　首先观察脑脊液标本的性状，化脓性脑膜炎患者的脑脊液多呈明显混浊，可直接涂片染色镜检。无色透明的脑脊液，应以3 000 r/min离心10～15 min，根据检验目的采取不同的染色方法　镜检，若发现阳性结果要立即报告。①一般细菌涂片镜检:取沉淀物涂片，革兰染色后镜检，根据染色性、形态、排列等初步报告。②疑为结核分枝杆菌感染:脑脊液沉淀物涂片，抗酸染色后镜检，根据染色性及形态特征初步报告。③疑为新型隐球菌感染:取脑脊液沉淀物行墨汁负染色，显微镜观察，根据形态特征初步报告。

3．分离培养与鉴定　根据检验目的不同，选择不同的方法　进行微生物分离培养。

(1)一般细菌培养:用接种环挑取混浊脑脊液标本或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板和巧克力色平板上，置于35℃，CO₂环境中培养18～24 h。根据菌落特点及形态学特征，进一步做生化试验及血清学试验进行鉴定，同时做抗菌药物敏感试验。

(2)结核分枝杆菌培养:疑为结核分枝杆菌时，接种于罗－琴培养基或米氏7H－10培养基，斜置于35℃温箱孵育7 d后直立，继续孵育至1个月，有细菌生长时，对菌落进行鉴定;如无细菌生长，则发阴性报告。

(三)脑脊液标本中常见的病原菌

脑脊液标本中常见的革兰阳性菌有肺炎链球菌、A群链球菌、B群链球菌、消化链球菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌、产单核李斯特菌等;常见的革兰阴性菌有脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、卡他莫拉菌、不动杆菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血杆菌等。

(四)临床意义

正常人体脑脊液是无菌的。当病原体通过血脑屏障进入中枢神经系统时可引起感染，病原体多为细菌、真菌和病毒。

细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染疾病的常见类型，其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，有的呈暴发型，病情严重，病死率较高，多发年龄在5～29岁，冬春季多发。结核性脑膜炎近几年呈回升趋势，为防治重点。近年来，肺炎球菌脑膜炎、链球菌脑膜炎仍常见，流感嗜血杆菌脑膜炎以及其他革兰阴性杆菌性脑膜炎均有发生，并有增多趋势。

病毒(如乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒)，真菌(如新生隐球菌、白假丝酵母菌)、螺旋体(如钩端螺旋体)也是神经系统感染的常见病原体，需通过病原学检验加以区分。