检测甲型肝炎病毒感染的指标有

一、甲型肝炎病毒

甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)属于小RNA病毒科肝病毒属。HAV是该属仅有的一个种。

(一)临床意义

HAV是甲型肝炎的病原体。传染源是患者或隐性感染者，尤其是无黄疸型肝炎患者。HAV主要经粪－口途径传播，传染性极强。HAV随患者粪便排出体外，通过污染水源、食物、海产品(如毛蚶等)、食具等传播而造成散发性流行或大流行。甲型肝炎的潜伏期为15～50 d。多侵犯儿童和青少年。起病急骤，有畏寒、发热(38～39℃)、腹痛、腹泻、食欲减退、恶心、疲乏、肝肿大及肝功能异常等。初起时往往误认为感冒，容易被人忽视，延误病情，继而引起暴发或散发流行。90%的患者有黄疸，消化道症状较重，一般预后良好，能完全恢复，长期携带病毒者极为罕见。患者可产生抗HAV的IgM和IgG抗体。IgM抗体出现在急性期，是早期诊断的依据;IgG抗体在恢复期出现并可维持多年，对HAV的再感染有免疫力。

(二)生物学特性

1．形态与结构病毒体呈球型，直径27 nm，无包膜，核心为单正链RNA，全长为7478bp，于5'末端具有基因组病毒蛋白。衣壳呈二十面体立体对称结构(图22－2，图22－3)。HAV只有一个血清型。

2．感染模型与细胞培养黑猩猩和狨猴对HAV易感，经口或静脉注射可使动物发生肝炎，并能在肝细胞浆中检出HAV，恢复期血清中能检测出HAV抗体。我国学者应用　国产猕猴属中的红面猴建立了HAV动物感染模型，粪便中可分离到HAV。目前多种原代及传代细胞株均可用于HAV的分离培养，如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)、人胚肾细胞、人肝癌细胞等，但HAV在体外细胞中增殖缓慢且不引起细胞病变，故不能直接识别细胞是否被感染。

图22－2　甲型肝炎病毒电镜

图22－3　甲型肝炎病毒结构示意

3．抵抗力　HAV抵抗力较强，耐酸、耐热、耐有机溶剂，对乙醚和氯仿稳定。HAV在水源、海水、土壤及毛蚶类水产品中可存活数天至数月。HAV经121．3℃20min、100℃5 min、干热180℃1 h可被灭活。氯、过氧乙酸、甲醛等均可消除其传染性。70%的乙醇能迅速灭活病毒。HAV能抵抗2%～5%来苏儿和200×10^－6的有效氯达1 h以上。

(三)微生物学检验

1．标本的采集采用标准的血清分离方法　，采集急性期和恢复期双份血清，有助于准确测定HAV－IgM抗体和HAV总抗体水平。血清4℃可保存3周，抗体水平仍然稳定。测定粪便中抗原，必须在发病前2周或出现症状后数天内采集粪便标本。采用0．02%叠氮钠(PBS)配制20%的粪便匀浆，－70℃保存6个月，抗原性不变。肝组织活检标本可用来做免疫荧光或电镜检测。

2．抗原检测甲型肝炎患者一般不做病原体分离检查，在潜伏末期及急性期早期，用免疫电镜可在甲型肝炎患者粪便中检测到HAV颗粒。用ELISA和RIA法测HAV抗原，用核酸杂交法、PCR技术测HAV RNA，但不常用。

3．抗体检测①HAV－IgM抗体检测:检测方法　为ELISA法和RIA。病人血清HAV－IgM检测是甲型肝炎早期诊断最实用的方法　，也是最常用的特异性诊断指标。目前常用IgM抗体捕捉ELISA检测法，敏感性与特异性均较高。几乎全部的甲型肝炎患者在出现症状时(病后2～12周)都是抗HAV IgM阳性，而且效价很高(ELISA法效价≥1∶1 000，RIA法≥105～106)。②HAV－IgG抗体检测:检测方法　为ELISA法，血清HAV－IgG检测主要用于流行病学调查、了解个体的既往感染或HAV疫苗接种后的效果。

4．核酸检测提取标本中HAV RNA，反转录出cDNA进行PCR扩增，其产物经溴乙锭在琼脂糖凝胶电泳染色，或经杂交进行检测，可检出样本中极微量的HAV。