三、丙型肝炎病毒
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科的肝病毒属。
(一)临床意义
丙型肝炎的传染源是患者和病毒携带者,传播途径包括血液传播、性接触传播、母婴传播、家庭内接触传播。但约近半数HCV感染者传播途径不明。目前HCV占输血后肝炎的80~90%,又有输血后肝炎之称。在发达国家,丙型肝炎是输血后肝炎最常见的形式。
(二)生物学特性
HCV为单正链RNA病毒,球形,直径为40~60 nm,有包膜。其电镜形态尚未观察到。RNA长度约9.5 kb,由9个基因区组成,其5'端非编码区序列保守性强,在各株病毒间少有变异,可用于诊断。基因组中的包膜蛋白易发生变异,能逃避免疫细胞及抗体的识别,病毒得以持续存在。HCV毒株的基因型可分为6种,欧美各国流行株多为Ⅰ型,我国以Ⅱ型为主。Ⅱ型HCV复制产生的病毒量多,较难治疗。
HCV不能体外培养,在血液中存在量很少,故对HCV的认识主要来源于黑猩猩动物实验及分子生物学技术所得结果。HCV感染黑猩猩并在体内连续传代,引起慢性肝炎。
HCV的抵抗力较弱,对酸、热不稳定。用1∶1 000甲醛37℃4 d、加热100℃5 min或60℃30 min可灭活病毒。血液或血制品经60℃处理30 h可完全灭活HCV。对氯仿、乙醚等有机溶剂敏感。
(三)微生物学检验
1.标本采集HCV RNA的检测选用无菌血清或血浆。分离血浆时用枸橼酸盐或者EDTA作为抗体凝剂。如进行PCR检测应避免使用肝素,因为它对DNA聚合酶有抑制作用。标本采集后应尽快分离血清或血浆并在4~6 h内冷藏或冻存。由于在-20℃时HCV RNA易发生明显降解,最好冻存在-70℃以下环境。
2.抗体检测用ELISA法检测抗体,可快速筛选供血人员,并可用于诊断丙型肝炎。抗-HCV阳性者表明已感染,不可献血。若需确诊,可进一步用重组免疫印迹法(recombinant immunoblot assay,RIBA)测不同表达蛋白的相应抗体。
3.核酸检测目前HCV的感染诊断也可用套式RT-PCR方法 查HCV RNA,其方法 是自待测者血清提取RNA,用反转录酶形成cDNA,再用保守序列为引物,用PCR方法 两次扩增HCV-RNA,可提高检出率。
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