实验八 过氧化物酶染色
Peroxidase staining，POX
一、实验目的
掌握四甲基联苯胺法过氧化物酶染色的原理和临床意义，能正确判断过氧化物酶染色结果，能进行过氧化物酶染色的操作，知道其注意事项。
二、实验原理
粒细胞和单核细胞胞浆内含过氧化物酶（peroxidase，POX），能催化过氧化氢而释放新生氧，使四甲基联苯胺（TMB）氧化，生成四甲基联苯胺蓝，再与亚硝基铁氰化钠结合成稳定的蓝色颗粒而沉淀于细胞胞质内。
三、实验器材
新鲜血片或骨髓片、显微镜、擦镜纸。
四、实验试剂
1.0.1％四甲基联苯胺（TMB）乙醇溶液：0.1gTMB溶于100ml 88％乙醇中，贮于棕色瓶中，4℃保存。
2.亚硝基铁氰化钠饱和溶液（360g／L）：少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰化钠晶体，搅拌直至不再溶解为止，贮于棕色瓶中，4℃保存。
3.1％过氧化氢溶液（新鲜配制）：取30％过氧化氢1ml加入蒸馏水29ml。
4.稀过氧化氢溶液：临用前将1％过氧化氢1滴加蒸馏水10ml稀释。
5.瑞氏染液、香柏油、乙醚乙醇液。
五、实验方法
1.取0.1％TMB乙醇溶液1ml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μl，在临用前配制。
2.新鲜干燥血片或骨髓片，加0.1％TMB‐亚硝基铁氰化钠饱和溶液的混合试剂0.5ml，使布满整张涂片，放置1min。
3.加稀过氧化氢溶液0.7ml，用吸球吹吸，使两液混匀，作用6min。
4.涂片用流水冲洗，待干后再用瑞氏染液复染，复染时间要稍长于（约10～20min）普通染色时间。
5.水洗，待干，用油镜镜检。
6.结果判断（见彩图2‐1）：胞浆中出现蓝色颗粒为阳性。判断标准如下：
阴性：胞浆中无蓝色颗粒。
弱阳性：胞浆中蓝色颗粒量少且细小，相当于（＋）。
阳性：胞浆中蓝色颗粒量多，粗细不一，相当于（＋＋）。
强阳性：胞浆中细胞充满粗大紧密蓝色颗粒，相当于（＋＋＋）。
7.报告阳性程度或阳性细胞百分率。
六、注意事项
1.血片或骨髓片应新鲜，立即固定，才能保持酶的活性。
2.TMB配制在85％～88％乙醇溶液中染色效果较好，勿用95％乙醇，否则使显色反应减弱或消失。
3.过氧化氢溶液需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。过氧化氢加于血片上，应有气泡产生，否则示失效，应重新配制。过氧化氢浓度太高，粒细胞中看不见阳性颗粒。
4.在涂片上两液混匀时，动作要轻，以免将阳性颗粒吹散到阴性细胞上。
七、结果报告
八、临床意义
1.粒细胞系统：原始粒细胞呈阴性或阳性（分化差的原始粒细胞呈阴性，分化好的原始粒细胞呈阳性），早幼粒细胞及以后幼稚粒细胞均呈阳性，并随细胞发育成熟，阳性反应程度递增。成熟的中性粒细胞中含丰富均匀细小的阳性颗粒，嗜酸性粒细胞中颗粒粗大呈深蓝色，嗜碱性粒细胞呈阴性。
2.单核细胞系统：除部分原始细胞外，皆呈弱阳性反应，其颗粒细小稀疏。
3.某些组织细胞及吞噬细胞可呈不同程度的阳性反应。
4.所有淋巴细胞过氧化物酶染色皆为阴性。
5.该化学染色是区别急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞性白血病（M1～M5）的主要细胞化学染色，FAB分型规定前者阳性率＜3％。
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