用苏丹三染色为什么不用无水乙醇

实验九　苏丹黑B染色

Sudan black B staining，SBB

一、实验目的

了解苏丹黑B染色的原理、临床意义。能进行苏丹黑B染色操作、正确判断结果、知道苏丹黑B染色注意事项。

二、实验原理

苏丹黑B是一种能溶解于脂肪中的重氮染料，使细胞内的中性脂肪、磷脂和类固醇等含脂结构呈棕黑色或黑色颗粒而显示出来。

三、实验器材

血片或骨髓片、染色缸、水浴箱、显微镜、擦镜纸。

四、实验试剂

1.40％甲醛液或10％甲醛生理盐水（可省略）。

2.苏丹黑B备用液：取苏丹黑B粉剂0.6g溶于200ml纯酒精中用研钵慢慢研溶，并在室温下放置1～2天，待充分溶解，可冰箱保存1年。

3.缓冲液：苯酚16g加无水乙醇30ml，磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O）0.3g，加蒸馏水100ml，两份溶液相混即成缓冲液，可保存1年。

4.染色液：以苏丹黑B备用液30ml，缓冲液20ml，两液混后过滤配成，加盖可重复使用，一般可保存6～12个月。

5.70％乙醇（或无水乙醇）。

6.瑞氏染液。

五、实验方法

1.血片或骨髓片干后，用40％甲醛液或10％甲醛生理盐水固定10min（可省略固定，将血片或骨髓片直接放入苏丹黑B染液中）。

2.浸入苏丹黑B染液中，37℃水浴30～60min。

3.取出后立即用70％乙醇（或无水乙醇）漂洗涂片约10s，水洗。

4.瑞氏染液复染20～30min，水洗，待干，用油镜镜检。

5.结果判断：在胞质中出现棕黑色或黑色颗粒为阳性反应。阳性程度判断标准如下：

阴性：胞浆内无棕色颗粒。

弱阳性：细小、分布稀疏的棕黑色颗粒，相当于（＋）。

阳性：黑色颗粒粗细不一，量较多，分布不均，相当于（＋＋）。

强阳性：黑色颗粒粗大，充满整个细胞，常盖到核上，相当于（＋＋＋）。

6.报告阳性程度或阳性细胞百分率。

六、注意事项

1.苏丹黑B备用液和缓冲液避光且加盖密封可保存1年，染色液用后放试剂瓶中，也要加盖保存。染色欠理想时，应及时更换。

2.70％乙醇（或无水乙醇）脱色时，时间不宜太长，否则可将阳性颗粒脱去。

3.冬天或从冰箱取出的染色液应先放置37℃水浴预温10min后，再进行涂片染色。

4.放置时间较长的涂片，应选用SB染色，不宜作POX染色，因脂类较稳定。新鲜涂片最好与POX同时进行。

七、结果报告

八、临床意义

本试验与POX反应基本平行。POX染色要求涂片新鲜，而苏丹黑B染色则无此要求。临床意义与POX染色相似，有时能互相弥补。